植物实验指导书

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1、《环境生理学》实验指导书实验一、植物气孔分布的观察1.基础知识气孔（Stomata）是山植物叶片表皮上成对的保卫细胞以及之间的孔隙纽成的结构，是植物与外界进行气体交换的门八和控制蒸腾的结构。气孔在碳同化、呼吸、蒸腾作用等代谢活动中，成为空气和水蒸汽的通路，其通过量由保卫细胞的开闭作川來调节，在植物环境牛理上具有重要意义。-叶脉:上表皮—般來说，气孔在白天开放，晚上关闭（景天科的植物除外）。与表皮细胞不同，保卫细胞在结构中含有叶绿体，只是体积较小，数目也较少，片层结构发育不良，但能进行光合作用合成糖类物质。有时也伴有与

2、保卫细胞相邻的2-4个副-卫细胞。把这些细胞包括在内是广义的气孔器。紧接气＞叶肉-下表皮■■气孔孔下面有宽的细胞间隙（气室）。浮水植物的气孔只在上表皮分布，陆生植物叶片的气孔在上下表皮都可能有，一般阳牛植物的气孔分布在叶下表皮较多。花序、果实、尚未木质化的茎、叶柄和卷须上也有气孔存在。气孔的大小随植物种类和器官而异，一般长约20-40屮n,宽约5-10pnio每平方厘米叶而上约有气孔2000-4000个。气孔的开闭机理：当肾形保卫细胞吸水膨胀时，细胞向外弯曲,气孔张开，而保卫细胞失水体积缩小时，壁拉直，气孔关闭；哑铃

3、形保卫细胞吸水时两头膨胀而中间彼此离开，气孔张开，火水时两头体积缩小中间部分合拢，气孔关闭。RodiallyarrangedcellulcnemicrofibrilsEpidermalRadiallyarrangedcellulosemicrofibrtls!2.实验材料与器具植物叶片、培养皿、刀片、蹑子、毛笔、清水、透明指甲汕3・仪器设备显微镜(BX51,OlympusCO.,Japan)4.操作步骤4.1徒手制片（1）徒手临时切片法在培养皿中放入清水，将欲切材料断而沾水，以在手拇指、食指、中指捏住材料，拇指略低于

4、食指和屮指，材料切面应稍高于食指，其余手指略低于食指，以免切片时损伤手指。右手执刀,将刀平放在左手食指上，刀口朝内指向材料切割面饼•材料断面平行，然后以均匀快捷的动作口左前方向右后方以臂力带动刀片水平切割移动（手腕不必用力）。切片时动作要迅速，材料一次切下，切忌停顿或拉锯式切割。连续切数片后，用湿毛笔将切下的薄片轻轻移动到盛水的培养1UL中备用。川毛笔或锻子挑选最薄而透明的切片置于载玻片上，盖上盖玻片作为临时切片，置于显微镜下即可观察气孔。注意：1）整个切片过程中均用清水润湿材料和刀面；2）切片时应注意要连续切片，不

5、要切一片看一片，否则切不出好的薄切片且费时；3）切片过程中有时因用力不均或刀不锋利而出现切片倾斜的现象，要及时修正；（2）指甲油涂抹撕取制片法将植物叶片展开，清除表面灰尘，若表面有水，用吸水纸吸干。将指甲油均匀涂抹于取材部位上，使其自然晾干3-8min（受光照、风等影响，晾干所需时间不一），待指甲油涂抹层接端稍稍为叶片出现离口时，用银子夹住离口处撕下已干的指甲油涂抹层，然后将其放至加有一小滴水的载玻片上，借水的表而张力，将薄膜向然展开。盖上盖玻片后作为临吋切片，置于显微镜卞即可观察气孔。4.2显微镜观察（1）対光。先

6、将低倍物镜转到载物台中央，正对通光孔。用左眼接近目镜观察，同时用手调节反光镜和集光器，使镜内光亮度适宜。镜内所看到的范围叫视野。（2）放片。把切片放到载物台上，被观察的部位对准物锐，用压片夹固定切片。（3）观察。转动粗准焦螺旋，使镜筒缓慢下降，至物镜接近切片时为止。然后左眼从目镜向内观察，并转动粗准焦螺旋使镜筒缓慢上升，直至看到物象为止（証微镜内的物像是倒像），再转动细准焦螺旋，将物像调至最清晰。需耍CCD拍照时将观察筒右侧的光路切换拉杆拉出一档（拍摄同时可以镜下观察）或两档（只能拍摄）即可。（4）还镜。使用完毕应先

7、将物镜移开，再取卜•切片。把显微镜擦拭干净，各部分恢复原位。注意：1）先川软的擦镜纸或吸耳球去除光学元件1二明显的灰尘；川镜头纸蘸取少量擦镜液（乙储:无水乙醇=7:3（V/V）配置），轻轻擦去镜头上的油污。（2）使用显微调焦系统吋切忌快速人力的拧调节旋钮，及左右相反方向拧调节旋钮，以免损伤齿。（3）关闭显微镜光源后，将亮度旋钮轻轻拧到最小位置；注意每次使用后等灯室冷却后再盖上防尘罩，以免发牛火灾。图1显微镜下洋兰叶片的气孔状况图2显微镜下铁皮石斛的气孔状况1.基础知识叶绿素(Chlorophyll)作为绝大多数绿色植

8、物叶绿体中含量最多的色素，是光合作用中捕获光的主要成分，其含量与光合速率、作物营养状况密切相关。叶绿素通常被当作评估农作物生长发育阶段的氮素胁迫和光合作用能力的指示器，也是评价植物生理状况的一项重要指标。植物叶绿素含量的测定大致可分为基于比色原理的分光光度法和基丁•光透过原理的活体测量法两大类。分光光度法是一种破坏型的测量方法，需把叶绿素溶解到