新型混合模式色谱强化抗体纯化的研究

《新型混合模式色谱强化抗体纯化的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、第一章文献综述11.1引言11.2抗体的结构、来源及重要性11.2.1抗体的基本结构11.2.2抗体的来源31.2.2.1多克隆抗体31.2.2.2单克隆抗体31.2.2.3基因工程抗体41.2.3抗体的重要价值41.3抗体纯化常用的液相色谱技术51.3.1沉淀技术51.3.2凝胶过滤色谱61.3.3离子交换色谱61.3.4疏水性相互作用色谱61.3.5亲和色谱61.4混合模式色谱71.4.1简介71.4.2混合模式色谱的优点81.4.3混合模式色谱纯化抗体81.5本文的主要工作9第二章混合模式色谱

2、介质的合成及吸附性能研究102.1引言102.2材料与方法102.2.1实验材料与设备102.2.2蛋白质溶液标准曲线122.2.3介质的活化122.2.3.1活化过程132.2.3.2测定活化率132.2.4配基的偶联142.2.4.1偶联方法142.2.4.2测定配基修饰密度142.2.5蛋白质吸附平衡实验152.2.5.1缓冲液的配制152.2.5.2静态吸附容量测定152.2.6动态吸附性能162.2.7ANSepharoseFastFlow色谱柱的重复使用性能测试172.3结果与讨论172

3、.3.1介质的合成172.3.1.1活化率测定172.3.1.2配基修饰密度的测定172.3.2蛋白质静态吸附平衡实验172.3.2.1不同配基修饰密度下丫球蛋白吸附平衡实验172.3.2.2不同配基修饰密度下BSA吸附平衡实验182.3.2.3高浓度NaCl下丫球蛋白吸附平衡实验202.324高浓度NaCl下BSA吸附平衡实验212.3.3动态吸附性能222.3.4ANSepharoseFastFlow的重复使用性能232.4本章小结24第三章混合模式作用色谱介质纯化抗体253.1引言253.2材

4、料与方法253.2.1实验材料与设备253.2.2抗血清原料液的预处理273.2.3洗脱条件确定273.2.4上样条件优化273.2.4.1盐析处理方案283.2.4.2色谱纯化操作283.2.5从抗血清中纯化抗体293.2.6过量血清上样的抗体纯化303.2.7分析方法30Bradford法测蛋白含量30SDS-PAGE凝胶电泳303.3结果与讨论313.3.1上样条件优化实验313.3.1.1盐析处理的纯化结果313.3.1.2直接高盐上样和高盐清洗的纯化结果333.3.2不同配基密度下抗血清的

5、纯化结果33不同配基密度ANSepharoseFastFlow介质对RATS的纯化结果33不同配基密度ANSepharoseFastFlow介质对ASRS的纯化结果36MEP和MSSR对RATS和ASRS的纯化结果383.3.3过量血清上样的抗体纯化结果393.4本章小结394141♦♦♦♦♦♦♦♦I1第四章多柱连续吸附实验纯化抗体4.1勺I口4.2材料与方法4.2.1实验材料与设备414.2.2RATS抗血清原料的预处理414.2.3AN30SepFF的三柱串联连续吸附纯化实验414.2.4MEP

6、的三柱串联连续吸附纯化实验424.2.5分析方法424.3结果与讨论424.3.1AN30SepFF的三柱串联连续吸附纯化结果424.3.2MEP的三柱串联连续吸附纯化结果434.4本章小结43第五章结论与展望445」全文总结445.2应用展望45参考文献46附录50参研项目和学术成果53致谢54第一章文献综述1.1引言生物技术(biotechnology)是以现代生命科学为基础，结合其他基础科学的科学原理，利用生物体的特性和功能，采用先进的科学技术手段，设计改造生物体或加工生物原料，生产对人类有用

7、的物质以改善人类的生活品质和生活环境的技术，其必将成为在未来的几十年中发展最迅猛的一种核心技术。生物分离(bioseparation)过程包括目标产物的提取、浓缩、纯化及成品化等过程，是生物技术的重要组成部分⑴。生物分离过程的特性主要表现在生物R标产物的特殊性、复杂性和对生物产品要求的严格性上，结果就导致了分离过程的成本往往占整个成本的大部分⑵。在生物大分子药物的生产过程中，分离过程的质量常常决定了整个生物加工过程的成败，因此开发高效的生物分离技术、设计理性的生物分离过程能够人幅降低生物加工过程的成

8、本，提高产品的市场竞争力，促进人类健康水平和生活质量的提高以及社会经济的发展⑶。现代生物技术产品的主题Z—就是蛋片质药物，包括抗体药物、细胞因子、血液制品和疫苗等。抗体药物针对相应抗原具有非常高的特异性和亲和力，而且毒副作用较低，在疾病的诊断和治疗中显示出了明显的专一性优势，目前已经被广泛地运用于医学方面。抗体应用于人类疾病治疗的前提是获得符合药品规范的高纯度抗体产品。色谱技术因其高分离精度、方便清洁、易于实现自动化口满足GMP规范要求等优势而广泛用于分离纯化价格较昂