苹果壳色单隔孢溃疡病菌检疫鉴定方法

《苹果壳色单隔孢溃疡病菌检疫鉴定方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、ICS65.020.01B16中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S/TXXXXXXXXX苹果壳色单隔鞄溃疡病菌检疫鉴定方法InspectionandIdentificationofBotryosphaeriastevensiiShoemaker（送审稿）（本稿完成日期:2011-11-28）XXXX-XX-XX实施XXXX-XX-XX发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总发布本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T23635-2009的的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局，

2、中国检验检疫科学研究院本标准主要起草人：王卫芳，张秋娥，黄英，严进。苹果壳色单隔砲溃疡病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了植物检疫中苹果壳色单隔他溃疡病菌的检疫鉴定方法。木标准适用于苹果壳色单隔抱溃疡病菌所有寄主植物的原木、木制品（含木质包装）、枝条、茁木和果实的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注FI期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注口期的引用文件，其最新版本（包括所冇的修改单）适用于木文件。SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3原理依据苹果壳色单隔抱溃疡病菌的为害症状、菌落特征、病菌的无性

3、型和冇性型形态进行该病菌的检疫鉴定。4试剂及主要仪器设备4.1培养基及试剂马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA：每1（）0（）mLPDA由200g去皮马铃薯，2（）g葡萄糖，18g琼脂配制而成，121°C高压灭菌20min）＞燕麦琼脂培养基（OA：1OOOmLOA由30g燕麦片，20g琼脂配制而成，121°C高压灭菌20min）,100%乳酸、1%的次氯酸钠（NaOCl）、70%酒精、无菌水。4.2仪器与设备立体显微镜、生物显微镜（具汕镜和测微尺）、普通天平（感量（）.1g）、超净工作台、生物培养箱、高压灭菌器、载玻片、盖玻片、打孔器（总径4mm）o5检疫

4、与鉴定5.1症状检查检查抽取的原木、木制品、枝条和苗木树皮的表面是否冇溃疡，枝条是否冇枯死症状，检查果实是否有腐烂症状（症状描述和图片参见附录A.3、B.l）o将冇可疑症状的样品带回实验室作进一步检验。5.2室内检验5.2.1样品中的病菌形态学观察从树皮上采集子实体，横切片后，将切片组织转移到滴有无菌水的载玻片上，在常温下晾干后加一滴100%乳酸并盖上盖玻片，制成非永久性玻片。观察了实体(尤其是了座)的形态特征，记录分生砲子、产砲细胞或者子囊、子囊砲子的形态。分别测最50个子囊砲了、子囊、分生砲子和产砲细胞、10个无性型子座和10个有性型子座的大小，

5、拍摄并保存数码照片，同时将子实体转入培养基中纯化保存。5.2.2分离培养在样品小如果没有发现病原菌的子实体，则采用组织分离培养法，分离病部的病原菌。取发病部位的病健交界组织，切成4mmX4mm的小块，用1%的NaOCl表面消毒10min,无菌水冲洗3遍，置于直径9cm的PDA平板上，每皿放4〜6块，于25°C条件下12h黑暗/光照培养，将长出的菌落边缘的菌丝转至新的PDA平板上纯化。5.2.3分离物培养性状和形态学观察将纯化后的菌株在PDA平板上培养6d,釆用火焰消毒的打孔器从菌落上打取直径4nun的菌丝体块，转移到新的PDA平板上，在全黑暗条件下，

6、分别于20°C、25°C进行培养，每处理垂复3次，观察菌落形态、计算菌落的牛长速度、分牛抱子器形成的速度。待分牛抱子器形成后，观察分牛地子器及分生孑包子的形态，测量其大小，拍摄并保存数码照片。6鉴定标准6.1菌落特征在PDA平板上，菌落関形，初期白色，培养5〜6d后呈深橄榄色，月•冇大量的气生菌丝生成，在20°C、25°C黑暗条件下菌落生长速率分别为6mm/d、11mm/d。培养至6d菌落中央即现纠结成粒状的人量黑褐色分化抱子器。培养至9d少量的分牛:孑包子器顶部即现口色粘稠状分牛了包子

7、才

8、,培养至15d整个培养皿布满黑褐色分生抱子器，并且喷出大量

9、口色抱子团(菌落特征图参见附录B.2)。6.2无性繁殖器官的形态分生抱子器，单牛或聚牛，埋主于黑色的子朋上，成熟时部分开裂，深褐色至黑色，近球形，直径可达600pm,壁由三层组成，外层黑褐色，山厚壁细胞组成，中间层山深褐色的薄壁细胞组成，内层由透明的薄壁细胞组成。孔口屈中，圆形，具乳突。分生抱子梗圆柱形，透明，无隔膜，极少数分支具隔膜。产孑包细胞(11〜)12〜15pmx4~5pm,夕卜生芽殖型产葩，离散,圆柱形,透明，光滑,无限生长。分牛砲子器成熟后喷射出白色分牛砲子团。分生砲子透明，光滑，厚壁，长椭圆形至卵形，大小(23.5x)25.1〜25.7

10、(〜27.4)pmx(12.4〜)13.2〜13.5(〜14.3)pm,平均大小为25.4±1.0pmxl3