细菌形态检查

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1、实验一细菌形态检查【目的】①常握示教显微镜下所看到的细菌形态和特殊结构。②掌握细菌涂片制作，革兰染色操作。③掌握油镜的使用和保护方法，以便娴熟应用油镜观察细菌形态或结构。一、显微镜油镜的使用和保护法（一）显微镜油镜的识别（1）油镜头上都有标记：①标有100X或90X；（2）有白、黑或红色圆圈;（3）有“油域HI、0订字。⑵油镜头比其它接物镜长，孔径最小。（二）显微镜油镜的使用①使用显微镜油镜时，勿使镜台倾斜，以免镜油流出。②在玻片标本上加香柏油（镜油）一滴，置载物台上，使冇标本处对准聚光器中央（如肉眼看不清标本所在位置，应先用低倍镜观察），用移动器或用固定夹固定。

2、③眼睛从物镜侧面注视，右手转动粗调节器，使载物台上升，油镜头慢慢浸入油中，并几乎与玻片接触，但切勿压及玻片，以防损坏油镜头。④将聚光器升高，光圈开大，然后眼观镜筒内，两手转动反光镜采光，使视野内光线明亮。若光源为灯光或阴天采自然光时，则使用凹面镜。⑤眼观镜筒内，右手持粗调节器，缓慢下降载物台，当看到模糊物象时，再用细调节器调整看清物象。操作时严防油镜头与玻片相撞。（三）油镜的保护①显微镜是贵重精密仪器，使用时要精心保护，不得随意拆散和碰撞。②取送显微镜时，右手持镜臂，左手托镜座，平端于胸前，然后轻放于桌面上或柜箱内。③油镜用毕，载物台下降，取出标本片，用擦镜纸将油

3、镜上的油擦净，（用擦镜纸蘸二甲苯擦试，再用擦镜纸擦去二甲苯）擦镜时应顺其直径方向擦，不要转圈擦。④不用时，将镜头转离聚光器，油镜头朝前呈“八”字形，降下聚光器，对号放入镜箱。标本片按规定擦去镜油，放入标本盒，如该标本片不再使用，则投入消毒缸内。⑤防止与强酸、强碱、乙醸、氯仿、酒精等化学药品接触。（四）油镜加油的原理由于细菌个体小，必须使用90X或100X的物镜，以保证足够的放大倍数，同时为保证足够的亮度，必须滴加香柏油（因香柏油与玻璃的折光率相近似），由聚光器出來的光线通过玻璃和镜油，不发生折射，直接进入镜筒，光路见下图所/JiO油镜加油的原理二、细菌不染色标本检

4、查法【材料】①变形杆菌、葡萄球菌（8〜12h）肉汤培养物。②凹玻片、载玻片、盖玻片、凡士林、接种环、酒精灯。【方法】⑴压滴法取一张洁净载玻片，用接种环取葡萄球菌和变形杆菌幼龄菌液各2〜3环，分别置于玻片二端，加盖玻片，先用低倍镜对光，再用高倍镜观察细菌动力形态。曲于不是染色标本，光线宜暗，即降低聚光器，缩小光圈。⑵悬滴法在凹玻片的凹窝周围涂少许凡士林，用接种环取变形杆菌和葡萄球菌菌液,分别置于一盖玻片中央，将凹窝对准盖玻片反扣在盖玻片上，将二者压紧后迅速反转，使菌液悬于盖玻片。静置片刻后，先用低倍镜，再换高倍镜观察。观察时光线不宜过强，适当降低聚光器，缩小光圈，以

5、利观察。悬滴标本的制作⑶暗视野法①取下显微镜上原冇的明视野聚光器，换装暗视野聚光器；②取2〜3环菌液置于载玻片上，加盖玻片（同压滴法）；③在暗视野聚光器上加镜油；④置标本片于载物台上，上升聚光器，使其上面的镜油与载玻片接触；⑤转动反光镜，使光线集中于聚光器上；⑥用低倍镜观察，当视野中冇一圆形光环出现时，转动聚光器上的调节螺旋，将光环移至视野中央；⑦换高倍镜观察，用细调节器调节清晰；⑧若用油镜观察，则在盖玻片上加镜油。【结果】有鞭毛细菌运动的特点是：有明显的定向运动，从一处泳至另一处（变形杆菌）。无鞭毛细菌运动的特点是：呈原位的颤动，为环境中液体分子冲击造成（葡萄球

6、菌）。三、细菌的基本形态观察（绘图）注意细菌的大小（放大倍）、形状、排列、染色性。门喉棒状杆菌炭疽芽胞梭菌霍乱弧菌幽门螺杆菌四、细菌的特殊结构观察（绘图）量）荚膜芽胞鞭毛肺炎链球菌（注意荚膜和菌体）破伤风芽胞梭菌（注意芽胞的形状和位置）伤寒沙门菌（注意鞭毛的位置、数五、细菌涂片的制作【目的】细菌材料须涂布固定于玻片上，经染色后才能观察其形态、结构及染色反应。【原理】细菌的化学成分以胶体原浆蛋白为主，涂布在玻片上经火焰温热后可固定于玻片，再经染色冲洗即可被染上颜色，且不易被水冲洗掉。【材料】葡萄球菌、大肠埃希菌培养物、玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、火柴、消毒缸。【

7、方法】葡萄球菌人肠埃（1）涂片-:①于洁净载玻片两端各加一接种环生希菌理盐水；①以无菌操作法，分别将二种细菌涂布于盐水4'o（如取肉汤培养物涂片，则载玻片上不必加生理盐水）O但切⑵干燥：让所涂标本自然干燥或于火焰高处烘干，勿将涂膜烤焦。⑶固定：将标本通过火焰三次（涂冇标本的一而朝上）o细菌涂片制作【注意事项】①玻片要洁净无油，否则菌液不易涂开。不宜选用厚玻片，以免观察时视野难以调清。②取菌量宜少，涂片要匀而薄。水洗时要以细流水徐缓冲洗，避免直接冲洗涂菌处，切勿将未经火焰固定的标本立即染色水洗。六、革兰染色【材料】①葡萄球菌、大肠埃希菌培养物。②革兰染色液：结品紫、

8、卢戈碘液、