医学硕士研究生开题报告模板

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1、医学硕士研究生开题报告模板一、立题依据恶性黑色素瘤是一种高度恶性且最具侵袭性的癌之一，多发生于皮肤，早期发生血行转移。对放、化疗不敏感,在世界范围内发病率增高，人们一直在期待着可以征服恶性黑素瘤的新的疗法的出现！最近大量的数据表明恶性肿瘤的发展与T-钙粘蛋白的表达变化相关.T-钙粘蛋白已在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤中被检测到表达减少•最近的研究表明T/H—钙粘蛋白在乳腺癌中的重新表达能抑制肿瘤细胞的生长，降低体外培养的肿瘤细胞的侵袭潜能.T/H—钙粘蛋白这个新型钙粘蛋白分子在人类很多癌细胞中表

2、达都降低表明它或许在肿瘤细胞的侵袭和转移及维持正常细胞的表型中起重要作用.T/H—钙粘蛋白与肿瘤的发生、发展有着密切的联系,也许它会为肿瘤的诊断和治疗带来新的契机.T-钙粘蛋白是否对恶性黑色素瘤也有作用，目前还没有相关研究的报道，所以本实验将进行相关方面的探讨性研究！二、研究内容及预期成果研究内容：第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中T-cadherin表达情况第二部分T-cadherin基因克隆和真核表达载体的构建第三部分：T-cadherin基因的真核表达及生物活性分析创新点：首次将T-cadherin基因转染黑素瘤

3、细胞拟解决的关键问题：通过RT-PCR反应扩增出T-cadherin的基因全长。预期成果及提供形式：观察T-钙粘蛋白在正常皮肤组织细胞、痣细胞及黑色素瘤细胞中的表达情况！进一步阐明T-钙粘蛋白作用机制T-钙粘蛋白基因转染入黑色素瘤细胞后观察对其增殖和转移活性的抑制情况，探索临床诊断和治疗黑色素瘤及其它肿瘤的方法！三、研究方案研究方法：第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中T-cadherin表达情况免疫组织化学和免疫细胞化学1.材料：从正常人皮肤切取的痣组织，人黑色素瘤细胞株1.主要试剂和溶液第一抗体：兔抗人T-cadhe

4、rin抗体第二抗体：生物素标记羊抗兔IgG“三抗”：链亲和霉素标记HRP2.设备3.方法冷冻切片的免疫染色程序活细胞的免疫染色程序4.荧光显微镜检注意：为保证结果的可靠性应该同时设有对照阳性对照；阴性对照以证明抗体的特异性。第二部分T-cadherin基因克隆和真核表达载体的构1.材料：组织和细胞菌株与质粒工具酶试剂仪器2.方法引物的设计总RNA的提取：异硫氧酸孤-酚-氯仿抽提一步法甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分析其质量，观察所提RNA有无明显降解；逆转录RT反应：为了证实RT反应的成功设管家基因GAPDH为内对照PCR扩增：利用上下游

5、引物，在DNA聚合酶下对目的片段进行扩增，PCR过程设3-actin为内对照PCR产物的回收、纯化PCR产物的克隆DNA序列测定真核重组表达质粒的构建阳性重组质粒的鉴定和筛选质粒的大量提取转染黑色素瘤细胞第三部分：T-钙粘蛋白基因的真核表达及生物活性分析1•材料2.方法转染细胞的培养Western印迹法检测转染后蛋白的表达流式细胞周期分析凋亡的检测技术路线图：研究进度安排：——学习学位课程，查阅文献，完成课题设计——基本完成实验研究工作——完成实验补遗工作并进行统计分析，撰写论文论文答辩四、经费预算试剂费用：15000元BR＞组织

6、及细胞：1000元文献资料费：500元论文打印费：1000元答辩费：1500元五、课题可行性分析实验在导师的指导下进行，导师段昕所教授、主任医师对黑色素瘤的诊断治疗、检测方法和研究进展有深入的了解，对本课题的研究设计及实验有重要的指导意义。已完成黑色素瘤及T-钙粘蛋白研究最新进展的文献检索和综述报告工作。所有实验均在承德医学院附属医院皮肤病研究室和中心实验室完成。实验室的老师实验技术熟练，在细胞培养、免疫组化及分子生物学等方面都可给予指导；实验所需的科研仪器设备实验室均具备。参考文献:1.Toyooka,K0.,ToyookaS.

7、,VinnaniAK.,SathyanarayanaUGetalCancerRes2001Jun1；61：4556—602.Lee,,1996,2:776—7823.Zhong,Y.,,,etal2001ClinCancerRes・4.Takeuchi,M.,Misaki,A・,Chen,,etalHistopathology,35,87一85.Kawakami,M.,Staub,J・,Cliby,W.,etal,15,715—7206.Sato,M.,Mori,Y.,Sakurada,A.,et,43,285一2867.Sato

8、,M.,Mori,Y.,Sakurada,A・,etal,103,96一1018.Mori,Y.,Matsunaga,M.,Abe,T.,etalBr,80,556—5629.,2,776—78210.,Wu,Y.,Hedric,N&Gutmann