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《选修三——DNA的粗提取与鉴定2》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、选修三教学案系列：DNA的粗提取与鉴定学习目标：本课题通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。学习重、难点：DNA的粗提取和鉴定方法。基础知识梳理思考讨论%1.实验原理——提取DNA的方法：1•提取生物大分子的基本思路：（1）选用一定的方法分离。（2）DNA的粗提取：就是要利用DNA与、和等在方面的差异，提取DNA,去除其他成分。2.DNA的物理和化学性质：（1）DNA的溶解性：%1DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使，而使，或者，
2、以达到分离目的。%1DNA在0.14mol/L的NaCI溶港中溶解it,DNA会,其他杂质溶解。%1DNA不溶于溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。（2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：%1蛋白酶能水解，但是对没有影响。%1大多数蛋白质不能忍受60-80°C的高温，而DNA在以上才会变性。%1洗涤剂能够瓦解，但对没有影响。（3）DNA的鉴定：DNA在条件下，DNA遇会被染成色，因此可以作为鉴定DNA的试剂。%1.实验设计：1.实验材料的选取：凡是含有的生物材料都可以考虑，但是使用的生物组织，成功的可能
3、性更大。2.破碎细胞，获取含DNA的滤液：（1）动物细胞的破碎（以鸡血细胞为例）：在鸡血细胞液中加入一定量的，同时用搅拌，过滤后收集滤液即可。1纟纟d.DNA在NaCl溶液中的溶解度曲戋如下图即（图5-1）,请根据曲戋图，思考：，溶解度11.0.14mol/LNaCl浓度%1在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？%1如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？2•在下面的生物材料中哪些适合做提取DNA的实验材料？鱼卵、猪肝、菜花（花椰菜）、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、獗猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液
4、体培养基的大肠杆菌和哺乳动物的红细胞3•在动物细胞破碎时，蒸馆水的作用是什么？为什么？4•在植物细胞破碎时，洗涤剂和食盐的作用分别是什么？5•如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？6.此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？7•为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质？（2植物细胞的破碎（以洋葱细胞为例）：在切碎的洋葱中加入一定的和，进行充分的，过滤后收集研磨液。3•去除滤液中的杂质：方法一：%1在滤液中加入,使物质的量浓度为mol/L,除去杂质；%1再调节溶液物质的量浓度为_mol/L,析出,除去杂质；%1再用溶解DNAo方法二：直接在滤液中加
5、入嫩肉粉，反应10~15min,嫩肉粉中的能够分解蛋白质。方法三：将滤液放在的恒温水浴箱中保温注意严格控制温度范围，使蛋白质变性，而DNA分子还未变性，可将DNA与蛋白质分离。4.DNA的析出与鉴定：（l）DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积、&方案二与方案三的原理有什么不同？9•实验成功的关键是什么？10•从鸡血细胞中提取DNA：（1）柠檬酸钠的作用？（2）第一步中，蒸馅水和玻璃棒的作用什么？过滤后取得是滤液还是滤出物？（3）第二步中，NaCl溶液的浓度是多少？作用是什么？玻璃棒的作用是什么？,静置,溶液中会出现,这就是粗提取的DNAo用玻
6、璃棒搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。（2）DNA的鉴定：%1取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为的NaCl溶液5ml,将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。%1向两支试管中各加入4ml的o混合均匀后，将试管置于中加热5min,待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变。5•操作提示：%1以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g,防止o%1加入洗涤剂后，动作要、,否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要,以免,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。（4）
7、第三步中加入蒸馅水的目的是什么？玻璃棒起什么作用？（5）第四步中，过滤后取得是滤液还是滤出物？（6）第五步中，NaCl溶液的浓度是多少？作用是什么？（7）第六步中，过滤后取得是滤液还是滤出物？（8）第七步中，所使用的酒精溶液有什么条件？作用是什么？玻璃棒起什么作用？（9）DNA鉴定时，为什么要设置对照组？实验中能观察到什么现象？%1二苯胺试剂要,否则会影响鉴定的效果。%1盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附，由于细胞内DNA的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就会更少。因此，实验
8、过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程的DNA的损失。3•去除滤液
