ZZ-38无菌检查操作规程

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1、ZZ无菌检验操作规程生效日期版本/修改号文件编号页数A/0Q/JEM-ZZ-381/32006.7.1一、操作程序:1・培养基配制：(1).需气菌、厌气菌培养基称取硫乙醇酸盐干粉培养基30.0g溶于1000ml蒸僻水中分装，115°C灭菌30分钟。(2).霉菌培养基称取霉菌干粉培养基16.5g溶于1000ml蒸憾水中分装，115°C灭菌30分钟。2.培养基的要求(1)・在使用前,细菌培养基经30〜35°C培养48小时,霉菌培养基经20~25°C培养72小时，证明无菌方可使用。(2).制备好的需气菌、厌气菌培养基在4°C左右保存，15天内用完，管内厌气区小于液面

2、高度的三分之一不得使用,其它培养在30天内用完。3.培养基质量检查(1)・需气菌、厌气菌培养基经接种每lml含100个以下的籐黄八叠球菌(28001)菌液lml,置30〜35°C培养24小时后，应生长良好。(2).需气菌、厌气菌培养基经接种每lml含50个以下的生抱棱菌(64941)菌液lml,置30〜35°C培养24小时后，应生长良好。(3).霉菌培养基经接种每lml含50个以下的白色念珠菌菌液lml,置20〜25°C培养24小吋后，应生长良好。4.无菌操作室净化工作台空气消毒将无菌操作所用的样品、酒精灯、新洁尔灭、消毒棉花、银子、折金耳、接种棒、无菌衣裤、

3、口罩、鞋子、帽子等放妥，用紫外线消毒30分钟至1小时后进行试验。5•无菌、无热原的接受瓶的准备用500ml的具塞三角烧瓶用水、肥皂洗涤后，再浸入洗液中浸泡24小编制日期审核日期ZZ版本/修改号文件编号页数A/0Q/JEM-ZZ-382/3无菌检验操作规程生效日期CM时，取出用水，先刷，最后用蒸憾水冲洗数次至洁净，倒置凉干，加盖于高温烘箱内180°C干烤2小时或250°C干燥30分钟，放冷取出，做接受液用。6.实验操作工作人员进入无菌室，应随即将门关好，用70%酒精洗手及擦洗桌面，在无菌操作条件下打开样品。7.供试液制备(1).一次性使用无菌注射器供试液制备取6

4、支注射器，在无菌室内注射器吸取0.9%氯化钠注射液至总刻度标示容量冋拉芯杆，使活塞稍离液面振摇5次。(2).一次性使用无菌注射针供试液制备取10支注射针，在无菌操作条件下直接投入无菌培养基内。二、无菌检查1.每批供试液分别接种于需气菌、厌气菌培养基5管，其中1管接种金黄色葡萄球菌lull,供作阳性对照，另接种霉菌培养基2管，供试液的每管接种量与培养基的分装量按表1规立。表1供试液总量每管接种量培养基分装量W2ml0.515>2〜20ml1.015>20ml5.0402.接种后需气菌、厌气菌培养基在30〜35°C培养5天，霉菌培养基在20〜25°C培养7天，培养

5、期间，应每日检查有无朵菌、霉菌生长，阳性对照管需在24小时内长菌。、结果判定当阳性对照管显混浊并确定有细菌生长时(应在接种后24小时有细菌生长)，可根据观察所得的结果判定。ZZ版本/修改号文件编号页数A/0Q/JEM-ZZ-383/3无菌检验操作规程生效日期CM1・如果需气菌、厌气菌及霉菌培养管中均为澄清或虽混浊，但经证明并非有菌生长均应判为供试品合格。2•如果需气菌、厌气菌及霉菌培养管中任何一管显混浊，并确证为有菌生长，应重新取样依法复试两次。除阳性对照管外，其他各管均不得有菌生长，否则应判为供试品不合格。3•如在加入供试液后，培养基出现混浊或沉淀，经培养不

6、能从外观上判断时，可取该培养液转种入另一支相同的培养基中或斜面培养基上，培养48〜72小时后，观察是否再出现混浊或在斜面上有无菌生长，并在转种的同时，取少量培养液涂片制成染色标本，用显微镜观察是否有菌生长。生物指示剂的检测一、菌后由专职检验员收集原放置的生物指示剂送往生化室。二、生化室检验员在检测每一灭菌批的指示剂前做指示剂的阳性对照，然后将收集的指示剂放在专用培养锅中，倾斜一点放入然后揪碎里面的玻璃使里面的枯草杆菌黑色变种芽胞(ATCC9373)进入培养剂。三、将培养锅在35〜37°C培养48小时。如果指示剂颜色为蓝绿色没有变色则为阴性，判定为合格。如指示剂

7、颜色变为黄色则为阳性，判定为不合格。