提高红曲霉色素产量的研究

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1、提高红曲每色素产量的研究赵春海滨州职业学院生物丄程系山东滨州256624摘要以筛选出的红曲霧菌株作为初发菌株研究紫外线诱变育种对其产色素水平的彩响。结果表明用紫外线对红曲霉进行诱变处理使其产色素水平捉高55.12较大的提高了其产色素能力。关键词诱变筛选红曲色素中图分类号0936文献标识码A文章编号0517-6611200704-00966-01StudyonlmprovingYieldofMonascusPigmentZHAOChun-haiBiotechnoogyDepartmentolBinzhouVocationaCoegeB

2、inzhouShangdong256624AbstractTakingM5andM7whichseectedfromseveraMonsscusstrainsasoriginastainsthisarticestudiedtheeffectofutravioetmutationbreedingonthepigmentyied.TheresutshowedthatthepigmentyiedofMonsscuscoudbeobviousyimprovedbytheutravioetmutationbreedingmethod.Keyw

3、ordsMutationSeectionMonascuspigment红ill］霉是口前世界上唯一生产食用色索的微生物。红曲霉色索是红曲霉在生长代谢过程中产生的天然红色色素其作为取代觅菜红和胭脂红的食品着色剂越来越受到人们重视。人们积极探索采用液体发酵法生产红曲霉色索并已取得较好效果。而菌种产色素水平较低、色索生产成木较高是红曲霉色素日前还不能在食品屮广泛使用的主要原因。紫外线诱变是利用DNA对紫外线的强烈吸收作用使同链DNA的相邻H密吟间形成胸腺喘唳二聚体从而引起微生物突变或死亡。经紫外线损伤的DNA可以产生新的突变菌株提高产物产

4、量。笔者以液态发酵工艺为原理进行红曲霉紫外线诱变育种研究1・2。1材料与方法1」材料1.1」菌种。红曲霉微生物实验室保藏。1」.2培养基3・4。斜面培养基。葡萄糖10蛋白月东1.5琼脂2pH值6.0115灭菌30min种子培养基。玉米粉4酵母膏2K2HP4?3H20.5MgS4?7H20.1pH值6.0发酵培养基。玉米粉5酵母膏2K2HP4?3H20.5MgS4?7H20」pH值6.0。1」.3主要试剂与设备。7230G分光光度计上海精谊仪器仪表有限公司HZOO全温振荡器北京利康达圣科技发展有限公司。1.2方法121菌悬液的制备。将

5、培养1周的斜面加入无菌水置于菌种试管屮用接种环将砲子刮下经灭菌纱布过滤得抱了悬液。取lm泡了悬液逐步稀释制成不同浓度梯度的抱了悬液。122紫外诱变筛选流程5・6。菌种斜面培养制砲子悬液稀释涂平板紫外诱变平面培养挑单个菌落斜面培养摇瓶培养发酵罐培养测定色价。取直径6cm无菌平皿2套分別加入上述调整好的砲子悬液3m加入磁石置于磁力搅拌器上分别在不同时间、不同距离下进行诱变。将诱变后的他子悬液每浓度涂3套平血操作相同取未经诱变处理的菌悬液作为对照。培养1作者简介赵春海1979■男河北香河人硕士讲师从事微生物发酵及应用方面的研究。收稿日期2

6、0061102周后计数。致死率对照每毫升菌落数・处理后每毫升菌落数/对照每毫升菌落数X1001.2.3色价的测定。采用酒精法。吸取经100口尼龙布过滤后的发酵液2m加95的乙醇5m摇匀静置1015min加蒸绸水3m摇匀、过滤定性滤纸过滤。以50乙醇作对照。用7230型分光光度计在510nm处测定色价光度D值再乘以稀释倍数N即为发酵液的全部色素量。2结果与分析2」初发菌株的选择通过平板分离出的初发菌株经过摇瓶发酵试验结果见图1。图1初发菌株产色素结果图1表明在培养基及培养条件相同的情况下不同初发红曲霉菌株产色素的水平不同。其屮M5、M

7、72个菌株的产色素水平较高。2.2紫外诱变为了提高红曲霉的产色素能力以M5、M7为初发菌株对红曲每菌种进行紫外诱变处理在功率30W的紫外灯卜•诱变。淘汰负突变在每个最适条件卜•色价的结果见图2、3。试验表明同一诱变条件卜获得的菌株产色素水平并界较大说明紫外诱变可使菌株发主突变而耳有正突变即产色素水平升高和负突变即产色素水平下降之分其中负突变的几率大于正突变。并且通过单因子试验优化出最适的诱变时间和距离图2、3。2.3诱变和初发菌株产色素水平比较紫外诱变选得的菌株产色素水平较原始菌株有较人提高最高nJ达30.31/mF转第968页安徽

8、农业科学JournaofAnhuiAgri.Sci.2007354966968责任编辑陈娟责任校对胡先祥检测限为0.72ngo2.3精密度试验取浓度为0.022mg/ml苦龙甘对照品溶液在“2.3”色谱条件下测定色谱峰的峰面积计算得R