林木遗传育种学实验

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1、林木遗传学实验实验一植物有丝分裂制片及观察一、实验目的1.学习并掌握植物根尖或叶片材料处理、染色、压片及制片观察的方法。2.观察植物细胞有丝分裂各时期染色体的形态变化，了解有丝分裂全过程。二、实验原理各种生长旺盛的组织中，如胞原组织、根尖、芽尖等分生组织常常进行细胞分裂。经过适当的取材处理，加以固定、离解、染色、压片方法，可以迅速将细胞分散到载玻片中，进而进行有丝分裂和染色体动态的观察。这是遗传学上通过细胞分裂观察染色体行为、形态结构、数目，从而进行组织分析，鉴别杂种等常用的制片方法。三、实验器材1材料大蒜根尖2器具显微镜、小剪子、刀片、载玻片、盖玻片、培养皿、水浴锅、吸水纸、绘图

2、纸3药品卡诺氏固定液、0.1%秋水仙素溶液、0.1mol/L盐酸、醋酸洋红染液四、实验方法1发根大蒜为材料，将大蒜磷茎置于盛水的烧杯口上，使大蒜鳞茎与水相接，在25℃下发根。待根长1cm左右，于中午12:30～13:30切取根尖为宜。2预处理将剪下的根尖立即放入0.1％秋水仙碱，以药液浸没根尖为度，处理3～4h。3固定材料经预处理后，用流水冲洗，然后投入卡诺液Ⅰ（3份甲醇∶1份冰乙酸，现配现用）中固定20～24h，用95％的乙醇洗两次，转入70％乙醇中保存备用。4解离常用酸解法：从70％乙醇中取出固定好的根尖→流水冲洗３min→吸水纸吸干→放入小试管中→加适量1mol/LHCl于6

3、0±0.5℃水浴解离10～15min5染色1％醋酸洋红染色：将解离水洗后的材料吸干，挑取根尖乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴加1～2滴染液，染色10～20min，压片。6压片在经染色的材料上加一滴染液，盖上盖玻片，覆一层吸水纸，用带橡皮头的铅笔垂直敲打，或以拇指垂直紧压盖片(注意勿使盖片搓动)，使材料分散压平，便于观察。7镜检先在低倍镜下寻找有分裂相的视野，再用高倍镜或油镜仔细观察、记数或拍照。8临时封片保存如制片标本符合要求，而又只需要短期(一般在一周以内)保存，可采用石蜡临时封片。用烧红解剖针挑取少量石蜡(或石蜡与凡士林等体积混合物)沿盖片周围封闭。制作完成的制片标本要贴上

4、标签，注明材料名称、可观察到的有丝分裂典型时期、制片时间、制作者等信息。五、作业１制作细胞有丝分裂前、中、后、末各期的制片一张，中期应能数清染色体数。贴上标签，注明材料名称，染色方法，制片日期和制作者姓名。2绘制所观察到有丝分裂典型时期的染色体图像，并简要说明各时期染色体的行为变化和特征。间期有丝分裂前期中期后期末期实验二植物减数分裂一、实验目的1．学习花粉母细胞涂抹制片技术。2．通过观察进一步熟悉减数分裂的全过程及各个时期染色体的动态变化和形态特征。二、实验原理减数分裂是发生在配子形成过程中一种特殊形式的有丝分裂。减数分裂包含两次连续的分裂——减数第一分裂和减数第二分裂。通过减数

5、分裂所形成的四分体细胞（或雌、雄配子），其染色体数目只有体细胞的一半。减数分裂过程中染色体出现同源配对、非姊妹染色单体间片段交换、同源染色体相互分离等一系列独特行为。减数分裂细胞染色体制片取材以高等动、植物雄性生殖分裂较为方便。在适当的时机采集动物精巢或植物花蕾(花序)，经适当技术处理，压片就可在显微镜下观察到细胞的减数分裂过程。三、实验器材1.材料紫鸭跖草的幼嫩花蕾2.实验器具显微镜，酒精灯，载玻片，盖玻片，镊子，解剖刀，解剖针，等常用工具。3.药品卡诺氏Ⅰ，甲醇冰乙酸（甲醇∶冰乙酸=3∶1）固定液，１mol/LHCI，45％乙酸；0.5％醋酸洋红，改良苯酚品红，石蜡。四、实验方

6、法1．取材花序基部、花蕾较小，花色尚未变黄变紫，其中必有处于减数分裂的花药。2．固定将取得幼嫩花序或花蕾立即投入固定液中，处理12～24h。倒去固定液，用梯度乙醇(95％-80％-70％)依次浸泡漂洗5～30min，直至去除乙酸味。固定后可置70％乙醇中保存。3．涂抹用镊子、解剖针等工具取出花药置洁净载玻片上；用洁净的刀片或镊子压在花药上向一端轻轻抹去，将花粉母细胞压挤出来，注意勿使花药太过破碎；将挤出花粉母细胞(呈半透明胶状)小范围内涂成薄层。4．染色在涂好的载玻片上滴加一滴或半滴染液，稍后用镊子把所有可见花药壁残渣清除干净。5．镜检观察在低倍镜下寻找适当视野，并正确区分处于减数

7、分裂各个时期的花粉母细胞、二分体、四分体以及花粉粒、花药壁残留组织与细胞。间期细线期偶线期粗线期双线期终变期中期Ⅰ后期Ⅰ末期Ⅰ中期Ⅱ后期Ⅱ末期Ⅱ实验三染色体组型分析一、实验目的1．学习和掌握染色体组型分析的方法。2．进一步了解染色体形态特征、在细胞分裂中的联会形象以及染色体组、核型及染色体数目、结构变异与生物进化的关系。二、实验原理各种生物染色体的数目、形态和结构都是恒定的。染色体组型，也称为核型，指一个个体或物种的特有的染色体构成，包括染色体数目以及每一条染色体所特