(精选)细菌鉴定实验方法

《(精选)细菌鉴定实验方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、芽抱菌菌种鉴定部分实验1、好氧性■半固体琼脂穿刺半固体琼脂0.5-0.6%,一般培养用培养基们杰氏手册芽袍菌厌■性测定（1）厌氧鮮基酪素水解物20gNaCl5g雉底醋酸钠屮朋次硫酸钠琼脂2g1«I5g1000ml2、V-P实验（测定培养物终pH）培养基蛋白豚葡萄糖K2HPO4（或NaCl）水pH7.0-7.2毎管分装4〜5mh115V灭菌30min。5g5g5g1000ml5.注章事项作用e若测试的是芽抱杆菌的细胞时，则以SgNaO代K2HPO4,因它有缓冲3•接种接种试验菌于以上培养液中，每次二个重复，置适温培养2、6天（如为阴性可适当延长培养时间）。肠杆菌科的菌要求在37匸培养4天

2、检査。2•试剂肌酸NaOH0.3%或原粉40%3•培养接种与甲基红试验同。4•操作与结果观察取培养液和40%氢氧化钠等量相混。加少许肌酸，10min如培养液岀现红色，即为试验阳性反应.有时需要放置更长时间才出现红色反应。（科人微生物）按培养液一半的最加入6%蔡酚酒精液，摇匀，再按培养液1/3最加入40%氢氧化钾溶液，充分摇匀。呈现红色者为V-P阳性，不呈现红色为阴性，后者放培养条件下继续培养4h再观察判定。3、柠檬酸盐适用于芽抱菌:NaCI1gMgSO4.7H2O0.2gNH,H2PO40.5g柠椽酸钠2g蒸谓水1000ml0.04%酚红液20ml2.接种及噸在斜面上划线接种，适酬养3

3、~7天。培养基为碱性（指示剂蓝色或桃红色）者为阳也否则为阴也4、D・木糖、D•甘露醇芽抱菌培养基(NH4)2HPO4l.OgKC10.2gMgSO40.2g酵母膏0.2g琼脂5-6.0g糖或醇类10.0g蒸憎水1000ml漠甲酚紫（0.04%）15mlpH7.0-7.2,分装试管，培养基高度约4~5cm,112匸蒸气灭菌30mi%2•接种与观察以幼龄斜面培养物穿刺接种于上述培养基，适温培养，1，3,5天后观察，如指示剂变黄，表示产酸，为阳性；不变或变蓝（紫）则为阴性。5、衙萄糖产酸产气糖发酵培养基（科人微牛物实验）:牛肉膏0.5%蛋白腺1%氯化钠0.3%Na2HPO4.12H2O0.2

4、%0.2%漠麝香草酚蓝溶液1.2%（体积分数）蒸镭水配制，PH7.4方法：葡萄糖发酵管按上述成分配好后，加入0.5%葡萄糖，分装于冇一个倒置杜氏管的试管内，121°C火菌15min。其他糖分别配成10%溶液，无菌吸管吸取0,5mL加入10mL培养基内。蔗糖不纯，加热时会自行分解，采用过滤除菌法。乳糖发酵无牛肉膏。紫色培养基变黄者，利用葡萄糖产酸；培养基变黄，杜氏管中又有气泡，产酸产气，气泡似小米粒，产酸微量产气6、酪素水解及酪氨酸水解酪素水解试验（酪蛋白水解）牛奶平板的制备：収5g脱脂奶粉加入50mL蒸傑水中（或用50mL脱脂牛奶）,另称1.5g琼脂溶于50mL蒸傳水中,将两液分开灭菌

5、。待冷至45—50°C时，将两液混匀倒平板，即成牛奶平板。将平板倒置过夜，使农面水分干燥，然后将菌种点接在平板匕每皿町点接3~5株菌。适温培养1、3、5天，记录菌落周围和下面酪素是否已被分解而呈透明。配制该培养基时，切勿将牛奶和琼脂混合灭菌，以防牛奶凝固。酪氨酸水解将酪氨酸0.5g悬浮于10mL蒸憎水屮，115°C,20分钟灭菌,然后于lOOmL无菌的营养肉汤琼脂混合，倾倒平板，待凝固后，将测试菌接种于平皿上，培养7到14d,记录酪氨酸结品是否被水解而变透明。7、苯丙氨酸脱氨酶1•培养基酵母膏3gNaCl5gN^HPOq1g琼脂12gDL-苯丙氨酸2g蒸他水1000ml(或L-苯丙氨酸

6、)1gpH为7.0,分装试管.121V蒸气灭荫lOmig摆成长斜面。2・试剂10%(W/V)的FeCh溶液。3•接种与培养适当的浓度接种.37匸培养4h或8-24h测定。4•结果观察将试刑4~5滴滴到生长菌的斜面上，当斜面上和冷凝水中产生绿色时为阳性反应，即表明已形成了苯丙扇酸，不变则为阴性。8、卵黄卵磷脂酶1•培养基无菌条件下取卵黄加等量的生理盐水，摇匀后，取10ml上述悬液加人到融化的，约50〜55匸的200ml肉汁冻琼脂中，混合均匀合后倒入培养皿内。制成的卵黄平板过夜后即可使用。2.步骤取18-24h的斜面或培养液中的菌体点种在上述平板上，点的直径约为2〜3mm。每个平板可分啟点

7、5~7株菌•以不影响观索结果为宜。如为厌氧茵至少需要在上加盖无菌的盖玻片。适温培养18-24h观察°某些菌则需要在48h观察，如縈状芽抱杆曲。如菌落四周和下面有不透明的区岀现，表示卵磷脂分解生成I旨肪•说明有卵磷脂・。3•注意事项将卵黄生理盐水悬液加入到融化的肉汁腺培养基时，后者的温度必须掌握好.不宜过奇，否則卵黄凝固・制用的平板因而不能使用。9、硝酸盐还原到亚硝酸盐实齡1.培养基肉汁豚培养基1000mlKNQ,lgpH7.0-7.6每管分装4