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1、一、基因工程1、(a)基因工程的诞生(一)基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。2、(a)基因工程的原理及技术原理：基因重组技术：(-)基因工程的基本工具1•“分子手术刀”限制性核酸内切酶(限制酶〉(1)來源：主要是从原核生物屮分离纯化出來的。(2)功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苛酸序列，并且使每一条链屮特定部位的两个核昔酸Z间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性。(3)结果：经限制酶切割产生
2、的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2•“分子缝合针”一一DNA连接酶(1)两种DNA连接酶(E•coliDNA连接酶和T..DNA连接酶)的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别：E•coliDNA连接酶来源于噬菌体,只能将双链DNA片段互补的卷性末端Z间的磷酸二酯键连接起来；而T』NA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的Z间的效率较低。⑵与DNA聚合酶作用的异同:DA聚合酶只能将卑企楼査酸加到已有的核昔酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接西个她片昼的末端，形成磷酸二酯键。3•“分子运输车”一一载佐(1)载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具
3、有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。(2)最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。(3)其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1.FI的基因是指：编码蛋白质的结构基因。2.原核基因采取直接分离获得,真核皋因是人工合成。人工合成FI的基因的常用方法有反转录法和化学合成法O3.PCR技术扩增冃的基因(1)原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至90〜95°CDNA解链；第二步：冷却到55〜60°C,引物结合到互补DNA链
4、；第三步:加热至70〜75°C,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：基因表达载体的构建1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用O2.组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA,最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的星遇。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。第三步：将目的基因导入受体细胞—
5、1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2•常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法,其次还有基因枪法和花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。将目的基因导入微生物细胞：1.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是竝基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因,方法是采用DNA分子杂交技术。2.其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA,方法是采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。3.最后
6、检测目的基因是否翻译成蛋白质,方法是从转基因牛物中提取厘包廈,用相应的抗体进行o4.有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如转基因抗虫植物是否出现抗虫片生状7h）（b）基因工程的应用1.植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。2.动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。3.基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。（四）（a）蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程
7、在原则上只能牛产自然界已存在的蛋白质）（1）蛋白质工程崛起的缘由：基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质（2）蛋白质工程的基木原理：它可以根据人的需求来设计蛋白质的结构，又称为第二代的基因工程。基木途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核昔酸序列（基因）以上是蛋白质工程特有的途径；以下按照基因工程的一般步骤进行。（注意：目的基因只能用人工合成的方法）设计中的困难：如何推测非编码区以及
