微生物实验7 酵母菌

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1、微生物实验报告酵母菌的培养及观察实验刘欣怡201100140057生物科学基地班组别：周一下午三组同组者：曹平平，周楠，刘艺，刘希伟实验完成时间：2012年11月19号一、实验目的1、了解酵母菌的形态及出芽方式2、学习区分酵母菌的死细胞和活细胞3、掌握酵母菌子囊孢子的观察方法4、巩固显微镜操作技术和无菌操作技术二、实验器材1．菌种：酿酒酵母7d麦氏培琼脂（产孢培养基）斜面培养物，酿酒酵母2dYPD（酵母合成培养基）液体培养物。2.培养基：酵母合成培养基，麦氏琼脂斜面3、试剂：0.01%美蓝水溶液，5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液，95%乙醇，蒸馏水、香柏油、去离子水等。4.仪器试管，

2、锥形瓶，酒精灯，显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，盖玻片，双层瓶，接种环，滴管，滤纸，镊子、培养皿等。三、实验原理1、培养基：酵母菌的能源主要是糖，一般用麦芽汁琼脂培养基培养。但实验要求不是很严格时，可以用由酵母膏、蛋白胨、葡萄糖配置的培养基来培养；但酵母菌子囊孢子的观察要用麦氏培养基，其有利于子囊孢子的形成。2、酵母菌：酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。3、酵母菌的形态、大小

3、、结构：酵母菌是单细胞真菌，并非系统演化分类的单元；酵母菌细胞的形态通常为圆形、卵圆形或椭圆形。也有特殊形态，如柠檬形、三角形、藕节状、腊肠形，假菌丝等；比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1-5微米×5-20微米；酵母菌无鞭毛，不能游动；酵母菌具有典型的真核细胞结构，有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等，有的还具有微体。4、美蓝染色液：美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能

4、力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。还原剂（活细胞的新陈代谢）美蓝（氧化型）美蓝（还原型）氧化剂（死细胞无还原能力）蓝色无色5、水-碘液染色液：该染液将革兰氏染液用碘液用水稀释4倍后得到的，亦可用于酵母形态和出芽生殖的观察。6、子囊孢子的观察：酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件。麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。孢子染色原理：孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。在用对

5、比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。酵母菌子囊孢子的形成过程为：两营养细胞各伸出一个小突起而相接触，使两个细胞结合起来，而后接触处的细胞溶解，经质配和核配后，形成双倍体核，原来的细胞形成合子。此双倍体细胞可以进行芽殖。在适宜条件下，合子减数分裂，双倍体核分裂成4-8个单倍体核，核外再围以原生质逐渐形成子囊孢子，子囊孢子包含在由母细胞壁演变而来的子囊(即原来的二倍体细胞)中。子囊孢子的形成与否及其数量和形状，是鉴定酵母菌的依据之一。将酿酒酵母从营养丰富的培养基上移植到含有醋酸钠和葡萄糖(或棉籽糖)的产孢培养基上，于适温下培养，即可诱导其子

6、囊孢子的形成。本实验即以酿酒酵母为材料观察酵母菌的子囊孢子。7、酵母菌是少数能在缺氧环境里生存较长时间的一种微生物，它属于兼性菌类。在一般情况下进行有氧呼吸。如环境中有丰富的糖类，它进行缺氧呼吸。其过程如下：（1）C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O+2.87×103兆焦（有氧呼吸）（2）.C6H12O6→2CO2+2C2H5OH+109×103兆焦（缺氧呼吸）四、实验内容用酵母合成培养基（液体状）培养酵母菌后，进行制片并用美兰染色，进行酵母菌出芽及细胞死活的观察；用麦氏培养基（固体斜面）培养酵母菌一周后，涂片制片，然后依次用孔雀绿、番红水进行染色并水洗，用油镜进行镜检，观察子囊孢

7、子。五、实验步骤1、两种培养基的配置分别配置100ml麦氏培养基和120ml酵母合成培养基，其成分配比详见附录。其中，麦氏培养基在将称量好的成分都加入后，放在加热器上加热至琼脂完全溶解，稍稍冷却，用漏斗胶管装置分别向十只试管中加入麦氏培养基各不超过10ml，加塞并用牛皮纸包扎好；对于120ml的酵母合成培养基，用两个300ml锥形瓶各盛60ml，称量好各自的成分后，分别加入两个瓶中，轻轻摇晃匀，加塞并用牛皮纸包扎好。2、灭菌将需要灭