ISO李斯特菌

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1、国标标准ISO11290-11996（E）食品和动物饮料微生物学----单核增生李斯特氏菌的检测和计数方法------第一部分检测方法1.范围2.参考标准3.定义4.原理5.培养基和试剂6.设备和玻璃器皿7.取样8.待检样品前处理9.程序10.结果表达11.检测报告附录：A.检测程序图B.培养基和试剂的组成和配制C.亨氏斜射光镜检食品和动物饮料微生物学----单核增生李斯特氏菌的检测和计数方法------第一部分检测方法警告：为了保障实验室人员的健康，强烈推荐在适当装备、由有经验的微生物专家控制

2、以及检测中的所有培养物得以谨慎处理的实验室进行单核增生李斯特氏菌检测；尤其是强烈建议孕妇不要从事单核增生李斯特氏菌的培养工作。1.范围本ISO11290详细说明了单核增生李斯特氏菌检测和计数方法。在绪论中受讲座的局限性，本ISO11290适用于供给人类消费或作为动物饲料的产品。2.参考标准下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不

3、注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。IEC和ISO成员保留目前有效的国际标准的注册。ISO6887：1983微生物学—微生物检测中稀释液制备的一般导则ISO：1996，食品及动物饲料微生物学—微生物检测通则3.定义本部分ISO11290提供以下定义：3.1单核增生李斯特氏菌：在因体选择性培养基上形成典型菌落，并且当进行鉴定和确认其形态的、生理的和生化特征与本部分ISO11290的描述一致的微生物。3.2单核增生李斯特氏菌的检测：依据本部分ISO11290实施细则确定单核增生李斯特氏菌在给定

4、单位质量或体积的样品中存在与否。4.原理在本部分ISO11290的限定范围内，检测单核增生李斯特氏菌需要四个连续的阶段（见附录A检测程序图）。注意：1：单核增生李斯特氏菌可能存在量少，并与大量的其它细菌混杂，因此需要选择性增菌。同时必须检测受到损伤的李斯特氏菌，降低添加于初级选择性增菌培养基的抑制剂浓度可以至少部分达到此目的。4.1在选择性试剂浓度有所降低的选择性液体增菌培养基（半Fraser肉汤）中进行初级增菌接种于含有1体积氯化锂、1/2体积的吖啶黄素和1/2体积的萘啶酸的半Fraser肉汤

5、培养液，其一可用作检测部分（9.1）的稀释液，30℃培养24h。4.2应用含全浓度选择性试剂的液体增菌培养基（Fraser培养液）进行二级增菌把4.1得到的初级培养物接种于高选择性二级液体增菌培养基，35℃或37℃培养48h。4.3筛选、分离和鉴定把4.1和4.2步的培养物接种到两种因体选择性培养基上a）Oxford（b）PALCAM于30℃、35或37℃培养24h后检查，如有必要，继续培养24h后再次检查典型的单核增生李斯特氏菌可疑菌落。4.4确认筛选和分离4.3步所述的典型的单核增生李斯特氏

6、菌疑似菌落，传代培养，并用适当的形态、生理的和系列化的检测方法加以确认。5.培养基和试剂5.1常规原则对于目前实验室操作，详见ISO07218注意2：因为被认为更可取的培养基和试剂的数量较多，为使文章简洁，附录B给出其组分和制番。5.2初级选择性增菌培养基：选择性试剂浓度降低的Fraser培养液（半Fraser培养液）（见条款B.1）5.3含全浓度选择性试剂的选择性二级增菌培养液（Fraser培养液）（见条款B.2）5.4选择性固体分离培养基5.4.1第一种培养基：Oxford琼脂（见条款B.3

7、）5.4.2第二种培养基：PALCAM琼脂（见条款B.4）5.5固体培养基：胰蛋白胨大豆酵母浸膏琼脂（TSYEA）（见条款B.5）5.6液体培养基：蛋白胨大豆酵母浸膏琼脂（TSYEA）（见条款B.6）5.7绵羊血琼脂（见条款B.7）5.8糖类利用肉汤（鼠李糖和木糖）（条款B.8）5.9动力试验琼脂（可选做）（见条款B.9）5.10CAMP（Christle，Atkins，Munch-Petersen）培养基及试验菌株（见条款B.10）5.11过氧化氢溶液（见条款B.11）5.12磷酸盐缓冲液（P

8、BS）（见条款B.12）6.设备和玻璃仪器常用微生物试验设备（见ISO07218）以及下列设备和玻璃仪器：6.1干热灭菌设备（烤箱）或湿热灭菌设（灭菌锅）（见ISO07218）6.2干燥箱或培养箱：温控范围在25℃±1℃和50℃±1℃之间6.3培养箱25℃±1℃，30℃±1℃，35℃±1℃或37℃±1℃。6.4水溶液：47℃±2℃6.5接种环：铂/铱或镍/铬制成，直径大约3mm，以及同样材料制成的金属丝，或曲棍球杆形状的玻璃L-棒或一次性接种环6.6PH计：能读数接近0.001PH单位（25℃）