生物药物分析

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1、生物药物分析复习第一章绪论药物分析的性质：应用化学，物理化学和生物化学的方法和技术对药物的质量进行全面控制的学科。药物分析的任务：药物研制过程中的“眼睛”；制定药物质量标准；生产过程中的质量控制；开展临床药学研究；常规药品的检验。*药品质量标准：国家对药品质量及检验方法所做的技术规定。是药品生产，经营，使用以及检验和监督管理部门共同遵循的法律依据。*中国药典的内容：凡例，正文，附录，索引。药检工作基本程序：取样，鉴定，检查，含量测定，书写检查报告。酶法分析（终点法，酶循环放大分析法，速度法）是利用酶作为工具对特定物质（底物、辅酶、抑制剂和激动剂等）进行定量分析的方法。终点法(总变量法

2、)测定原理：先借助酶反应（单个酶反应或几种酶构成的偶联酶反应）使被测物定量的进行转变，然后在转变完成后，测定底物，产物或辅酶物质的变化量，因此称为终点法。终点法的条件：1.必须有专一地作用该被测物质的酶，并能得到它的制品；2能够确定使这种酶反应接近进行完全的条件；3.反应中底物的减少或产物的增加或辅酶物质的改变等可以借助某种简单的方法进行测定；4.在能满足这些条件的情况下，最好是采用单一酶反应就能进行定量检测。使用终点法测定应注意的问题：酶的底物的专一性（最好是绝对专一性）；反应的平衡；反应液中的酶量；反应产物的抑制。终点法的种类（一）单酶反应定量法：1、底物减少量的测定：胞嘧啶（2

3、80nm）、腺嘌呤（280nm）和尿酸（293nm或297nm）。2.产物增加量的测定：（1）各种氨基酸和草酸（2）黄嘌呤、次黄嘌呤以及CoA**3.辅酶变化量的测定（理解例子学会如何进行实验设计和分析）条件：测定以NAD或NADP为辅酶的脱氢酶的底物的量。原理：NADH和NADPH在340nm有特征最大吸收峰，而NAD和NADP在340nm却无这一吸收带，故可应用于NAD或NADP为辅酶的脱氢酶反应，通过测定340nm吸光度的变化，就可以对作用相应脱氢酶底物的物质进行定量分析。（二）和指示酶反应偶联的定量法1.以脱氢酶为指示剂（理解例子学会如何进行实验设计和分析）2.以脱氢酶以外的

4、酶作为指示剂酶循环放大分析法具有化学放大作用，理论上可无限放大其灵敏度。是利用酶循环设计的一种超微分分析法。步骤：转换反应，循环反应，指示反应转换反应：以试样中的待测组分为底物，经特异反应生成与待测组分相当的定量循环底物。循环反应：生成的循环底物反复参加由两个酶反应组成的偶联反应，所得产物量为循环底物的若干倍。指示反应：采用酶法测定反应产物。由反应产物量及循环次数，计算出循环底物量，再推算出试样中待测组分的量。酶循环放大分析法应用范围1.有循环底物参加的酶反应的底物或酶可测定(NAD、NADP、CoA)2.能与以上反应偶联的酶反应的底物或酶可测定（GATPHK）酶循环放大分析应该注意

5、的问题:1.在进行循环之前，必须完全除去转换反应中剩余的辅酶；2.在循环反应中底物（不是辅酶）必须过量；3.要用已知量的循环底物做循环反应和指示反应以求得循免疫分析——利用抗原抗体反应检测各种物质（药物、激素、蛋白质、微生物等）的方法。抗原与抗体性质及其相互作用免疫球蛋白分子由两条重链（H链）和两条轻链（L链）通过不同数目的二硫键结成Y形。在抗体分子的N端为“多变区”（V区），是抗体分子与抗原决定簇的结合部位；抗体分子的C端为“稳定区”（C区），是抗体抗原特异性部位。抗原抗体结合具有高度特异性。抗原的特异性取决于抗原决定簇的数目、性质和空间构型，而抗体的特异性则取决于抗体IgFab段

6、的可变区与相应抗原决定簇的结合能力。抗原与抗体通过很弱的短矩引力而结合，如范德华引力、静电引力、氢键及疏水性作用等。免疫扩散技术16第16页共16页基本原理：可溶性的抗原和相应的抗体在溶液或凝胶中彼此接触，形成不溶性抗原-抗体复合物沉淀。双向免疫扩散基本原理：指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散，彼此相遇后形成一定类型的特异性沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。双向免疫扩散的应用：1.抗原、抗体相对含量测定；2.抗原、抗体相对分子量分析酶免疫分析技术基本原理：指酶标记抗体或酶标记抗体进行的抗原抗体反应。它采用抗原与抗体的特异反应与酶连

7、接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。酶联免疫吸附试验（ELISA）：结合在固相载体上的抗原（抗体）与待检抗体（抗原）酶偶联物（标记物）反应后，催化水解或氧化还原酶的相应底物呈色，其颜色深浅与待测抗原（抗体）含量成正比。包被：指将抗原或抗体固相化的过程。它是通过物理吸附作用，一般靠疏水键连接。封闭：指用封闭剂封闭经包被的固相载体表面残留的未饱和位吸附位点的过程。常规使用的ELISA技术主要有：直接ELISA：测抗原间接ELISA：测抗体夹心ELI