黄瓜枯萎病病原拮抗细菌DS1菌株鉴定及其生防效果究

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1、黄瓜枯萎病病原拮抗细菌DS-1菌株鉴定摘要：采用平板对峙法，从日光温室连作黄瓜根际土壤中筛选出对黄瓜彳古萎病病原菌(Fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)具有稳定拮抗作用的细菌菌株DS-1,通过形态观察、生理生化测定和16S1QNA序列分析对该菌株进行了鉴定，并研究了对黄瓜种子萌发的影响和对苗期枯萎病的生防效果。结果表明：菌株DS-1与已报道的Brevibacillusbrevis16SrDNA具有100%同源性，结合形态特征和生理生化特性，确定DS-1为短短芽抱杆菌。基因库中

2、该菌株的序列登录号为EF108303cDS-1对黄瓜种子萌发具有促生作用，苗期防治枯萎病的效果显著，防效达84.92%o关键词潢瓜潢瓜枯萎病病原菌;拮抗细菌;鉴定;BrevibacillusbrevisAbstract:Thetaxonomicstatus,growthpromotingandbiocontroleffectsagainstFusariumoxysporumf.sp.cucumerinumofantagonisticbacteriumDS・1strain,screenedbyco-cultu

3、reonPDAplatesfromrhizosphericsoilofcontinuouslycroppedcucumberinsolargreenhouse,morphology,physiologicalandbiochemicalcharacteristics,and16SrDNAsequencingofthestrainweredetermined,theeffectsoncucumberseedgerminationandseedlingfusariumwiltbiocontrolwerestud

4、ied.Theresultsshowedthat:The16SrDNAsequenceofDS-1strainshared100%homologywithBrevibacillusbrevisfromGenBank.Basedontheresultsof16SrDNAsequencing,morphologicalandculturalobservationaswellasphysiologicalandbiochemicaldetermination,DS・1strainwasidentifiedasBr

5、evibacillusbrevis,withGenBankaccessionnumberEF108303.DS-1strainpromotedgerminationofcucumberseeds,withsignificantbiocontroleffectsagainstfusariumwiltofcucumberseedlingsby84.92%.Keywords:cucumber;Fusarium;oxysporum.f.sp.Cucumerinum;antagonistic;bacterium;id

6、entification;Brevibacillusbrevis枯萎病是黄瓜生产中的主要土传病害，连作危害严重。对黄瓜枯萎病的防控，生产上多采取选用抗病品种、嫁接、化学防治、土壤消毒和轮作换茬等措施，这些措施均取得了一定效果。此外，还可以利用生物防治的方法。目前，人们已经从土壤屮筛选出多种有益微生物,其中植物根际促生菌（PGPR）作为具有防病潜力和应用价值的一类生防菌受到国内外学者关注，并用于土传病害的防治DS-1是本课题组从R光温室连作黄瓜根际土壤中筛选出的对枯萎病病原菌具有良好拮抗作用的细菌菌株。对该菌

7、株进行了鉴定，并研究其对黄瓜种了萌发的影响及对苗期枯萎病的纶防效果，以期为进一步研究其作用机理和开发应用奠定基础。1材料与方法1.1试验材料LB培养基用于细菌分离、纯化和培养；PDA培养基用于病原真菌培养和拮抗菌筛选；PD培养基用于真菌抱子悬液制备。TaqDNA聚合酶、dNTP、buffer和PCR产物纯化试剂盒购口宝生物（大连）工程有限公司，琼脂糖购自上海生工生物工程技术服务有限公司，苴它试剂均为进口或国产分析纯。引物按文献（Weisburgetal.,1991；Watanabeetal.,2001）报道

8、的扩增细菌16SrDNA的通用引物设计，该引物可以扩增供试菌株几乎全部16SrDNA序列，由上海博亚生物技术有限公司合成。Primer1：5Z・AGAGTTTGATCATGGCTCAG-37；Primer2：5’1.2平板抑菌作用测定采用平板对峙法，将黄瓜枯萎病病原菌在PDA培养基斜面上活化，切成黄豆粒大小的块状置于平板中央，28°C下培养2do将拮抗菌株点种于病原菌菌片周围，每皿接种3~5个，设空白对照（不接种