生工石蜡切片提蛋白.pdf

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1、石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒FFPETotalProteinExtractionKit产品编号：C500058包装规格：50Assays产品简介石蜡包埋组织是很重要的临床材料，研究其正常细胞和疾病相关的细胞，特别是癌细胞中标记蛋白的差异表达水平，对于判断癌化的进展，癌症的类型的判定，以方便于诊断和治疗有重要的意义，然而体外培养的细胞的蛋白差异表达水平并不能够真实反映体内细胞的真实状况，因此从石蜡包埋组织中提取蛋白并且加以研究有很重要的意义，本试剂盒通过特殊的快速脱蜡试剂和蛋白质抽提试剂，在两种不同的温度条件下温育，可以将被铰链的蛋白质释放出来，经过简单的离心步骤，上清中含

2、有的蛋白经过沉淀洗涤和溶解后，可以用于WesternBlot、SDS-PAGE、ELISA、2D电泳或蛋白质芯片分析等，本试剂盒可以使用50次左右。产品特点1.不含有去污试剂，适用于非染色的标本。2.可以适用于甲醛浸泡的组织标本。3.不需要超速离心，可以同时处理多个标本。运输和保存条件所有试剂常温下运输，收到后DTT和提取试剂4℃保存，盛装预处理试剂A的瓶子已经密封，请在使用后，将剩余的预处理试剂A倒入一个有内盖的瓶中，同时盖紧内外盖，以防止挥发。盛装预处理试剂A，B和沉淀试剂的瓶盖要盖紧，同时避免火源。产品组成使用前将DTT完全溶解于提取试剂中，使用完毕后剩余的溶液在

3、4℃的环境中保存。成分C500058预处理试剂A100mL预处理试剂B5mL提取试剂5mL沉淀试剂sangon75mLbiotechDTT80mg操作步骤21.取两块大约10-15μm厚，100mm石蜡包埋组织切片到1.5mL的干净离心管中，加入1mL预处理试剂A，高速涡悬震荡30sec，室温静置5min，期间偶尔颠倒离心管数次。2.加入100μL预处理试剂B，涡悬震荡10sec，再10000rpm（10000g）离心2min，移去上下两层的液体。3.用500μL的双蒸水清洗脱蜡的组织两次，离心并尽量吸去液体，保留组织块沉淀。4.加入100μL提取试剂，盖上盖子，涡悬震

4、荡数秒。5.在电热消解仪或水浴锅中100℃加热20min，短暂离心一下，再用组织研磨棒将切片组织磨碎。6.在电热消解仪或水浴锅中60℃加热2hour，期间大约每20min取出，震荡一次。7.4℃，12000rpm（12830g）离心15min，小心将上清转移到一个新的1.5mL的干净离心管中。ü在上清中的蛋白质可以在4℃的环境条件下保存一个星期，如果需要长期保存，请放置在-20℃的环境中，同时避免反复冻溶，也可以使用我公司生产的非干扰型蛋白浓度测定试剂盒（C503071）对上清中的蛋白质直接定量。8.加入1mL的沉淀试剂，涡悬震荡10sec，在4℃的环境中保持10min

5、。9.4℃，12000rpm离心15min，去除上清保留沉淀。10.加入0.5mL的沉淀试剂，涡悬震荡10sec，在4℃的环境中保持10min，再4℃，12000rpm离心15min，去除上清，保留沉淀，在通风橱中将试管倒置在滤纸上，让残余的液体挥发干净。11.将固体沉淀溶解于合适的缓冲液中，再4℃，12000rpm离心5min，收集上清，用于SDS-PAGE，Westernblot等实验。ü此上清中含有DNA，RNA残留，所以溶液有些发粘，加入少量的micrococcalnuclease，benzonase等消化，有助于减少粘性，但是即使不处理一般不会影响后续实验，用

6、枪头将沉淀捣碎,同时加入含有Thiourea，Urea，NDSB-201或其它强溶解能力的去污试剂的缓冲液有利于沉淀的完全溶解。注意事项1.为提高石蜡包埋组织中蛋白质的回收效率，必须尽量减少在切片制作过程中甲醛固定时间，同时在石蜡包埋前彻底脱水，甲醛固定的时间越长，蛋白质的提取回收效率越低。2.尽量取用从石蜡包埋组织块中切取的薄片，或没有封闭到载玻片上的没有经过苏木精等染色的切片。3.材料越新鲜或甲醛固定时间越短，蛋白质的回收效率越高。4.提取试剂中含有含有刺激性的化合物，操作时要戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻，沾染皮肤眼睛后，立即用清水或生理盐水

7、冲洗，必要时寻求医生的帮助。5.对于甲醛浸泡的组织样本，每次可以取5-10mg的组织样本，用双蒸水洗涤离心收集后后，直接从步骤4开始操作。6.提取的蛋白沉淀如果用于ELISA、RIA等免疫实验，可能需要先进行抗原修复程序，但是如果用WesternBlot或Dotblot实验，一般情况下没有必要。7.本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果概不承担责任。sangonbiotech