7,8,9综合实验蚕豆根尖微核检测技术.ppt

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1、蚕豆根尖微核检测技术实验目的1.了解微核检测的原理和毒理遗传学2.学习蚕豆根尖微核检测技术实验原理微核（micronucleus，MCN）：是真核生物细胞内遗传物质的一种异常结构微核率（MCN‰）与作用因子的剂量或累积效应呈正相关污染指数实验材料蚕豆根尖实验步骤1、浸种催芽：将实验用蚕豆按需要量放入盛有自来水的杯中，浸泡24h，此间至少换水两次。种子吸胀后，25℃催芽，置于铺有湿润滤纸的培养皿中，经36—48h，大部分初生根长至1—2cm。2、用被检测溶液处理蚕豆根尖：每一处理选取3-5粒初生根生长良好的已萌发种子，放入盛有被测的培养皿中，被测液浸没

2、根尖即可。阳性检测因子可采用CrO3、NaN3、重铬酸钾、EDTA为加强阳性效果可适当加大溶度，如1.0—2.5mol/LCrO3和0.5—1.5mol/LNaN3、溶液。另外可取一污水作被检液之一，用自来水（或蒸馏水）处理作对照。处理根尖12—24h，此时间也可视试验要求和被检液溶度而定。实验步骤3、根尖细胞恢复培养：处理后的种子用自来水（或蒸馏水）浸洗3次，每次2—3分钟。洗净后再置于铺有湿润滤纸的中，25℃下恢复培养22—24h。4、根尖细胞固定：将恢复培养后的种子，从根尖顶端切下长1cm左右的幼根，用甲醇-冰醋酸（3：1）固定液固定24h。固定后的

3、根尖如不及时制片，可换入70%酒精中，置4℃冰箱中保存备用。5、酸解：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5min，吸净蒸馏水，加6mol/L盐酸将幼根浸没，室温下解离10min至根尖软化。6、染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1—2min。最后浸于水中，制片前取出置于载玻片上，截下1—2mm长的根尖，滴一滴石炭酸品红，染色10min，加一盖玻片，压片观察。7、显微镜观察、微核细胞记数：每一处理观察3个根尖、1000个细胞，统计MCN‰，计算污染指数实验步骤实验结果首先在显微镜下找到分生组织区细胞分散均匀，分裂相较多的部位，再转高倍镜观察。微核大小在

4、主核1/3以下，并与主核分离，着色与主核一致或稍深，呈圆形或椭圆形。每一处理观察3个根尖，每个根尖计数1000个细胞，统计其中含微核的细胞数，计算平均数，即为该处理的MCN‰，即微核千分率，以此可作为一个检测指标。根据你的实验安排列表填写实验结果。若进行污水检测，根据污染指数鉴定出你所测水样的污染程度，也可以计算被检化学药剂的污染指数。污染指数（PI)=样品实测MCN‰平均值/对照组（标准水）MCN‰平均值污染指数在0.50—1.50区间基本没有污染；1.51—2.00区间为轻度污染；2.01—3.50区间为中度污染；3.51以上为重度污染。实验结果