显微测微尺与血球计数板的使用.ppt

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1、显微测微尺与血球计数板的使用Index显微测微尺血球计数板显微测微尺的使用目镜测微尺镜台测微尺基本原理目镜测微尺：是一块放在目镜内隔板上的圆形小玻片。它的中央刻有精确刻度，有等分50小格或100小格两种，每5小格之间有一长线隔开。目镜测微尺每小格所代表的实际长度不一样，不能直接用来测量微小标本的大小，使用前要用镜台测微尺校正。镜台测微尺：中央部分刻有精确等分线的载玻片。一般每小格的长度是0.01mm，是专用于校正目镜测微尺的每格长度的。使用方法目镜测微尺的校正（10×为例）A放置镜台测微尺，使其刻度面朝上。B镜下看清镜台测微尺，转动目镜，

2、使目镜测微尺的刻度平行于镜台测微尺的刻度。C移动镜台测微尺使两种测微尺在某一区间内的两对刻度线完全重合，然后计数出两对重合线间各自所占的格数。D计算微生物或细胞大小的测定：A移去镜台测微尺，换上微生物或细胞染色玻片标本，调节焦距使物像清晰B转动染色标本或目镜测微尺，测出微生物或细胞的长度和宽度所占的格数，换算为单个标本的大小。C一般而言，为准确起见可以采用多次测量求平均值的办法确定微生物或细胞的大小。D复原：取出目镜测微尺，复原显微镜，将所用过的两种测微尺擦干净放回盒内保存。血球计数板的使用基本原理血球计数板：是一块特制的载玻片，其上表面

3、中央部分由四条槽分成三个平台。中间平台又被一短槽一分为二，每边各有一个方格网，每个方格网有九个大小相等的大方格，中间的一个大方格即计数室，就是计数微生物或细胞的部位，计数室刻度一般有两种规格：A、大方格分成16个中方格，而中方格又分成25个小方格的一种(图左)B、大方格分成25个中方格，而中方格又分成16个小方格的一种(图右)。但两种规格的计数板均有400个(16×25或25×16)小方格。计数室容积一定，将待测标本的均匀悬液放在计数室中并在显微镜下计数，就可算出单位体积内的微生物总数目。计数室容积为1×1×0.1=0.1mm3＝10－4

4、ml计数公式：1ml悬液中的微生物总数(个)=A×B×n×104A为每个中方格中的微生物数平均值，B为稀释倍数，n为每大方格中的中方格数。使用方法(1)稀释、将浓的标本悬液进行适当稀释。(2)镜检、加样前，先要检查计数室内有无污物，若有则需清洗后烘干使用。(3)加样、血球计数板上盖上清洁干燥的盖玻片，用无菌的细口滴管将稀释的微生物悬液从盖玻片边缘滴一小滴(不宜过多)。这样通过毛细渗透作用液体可沿缝隙进入计数室，注意要使计数室中不产生气泡并且充盈稀释液。(4)计数、将计数板置于载物台上静置5分钟左右，先用低倍镜找到计数室，然后换上高倍物镜。

5、分别计数任意5个中方格内的微生物数(最好选4个角和中央的方格)。位于格线上的菌体或微生物一般只数上线和右线上的或下线和左线上的。要计数两个计数室求平均值。(5)清洗、一般用水冲洗血球计数板，切勿用硬物洗刷，以免磨损计数室。洗完后要烘干或晾干。镜检，直至干净。～完～