微生物实验室培养.docx

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1、2.1微生物的实验室培养教材分析：“微生物的实验室培养”是研究和应用微生物的前提，其基本操作技术是生物科学、医学等领域最基本的实验技术，也是高中生必须掌握的实验操作技术。“微生物的实验室培养”是选修1的专题2“微生物的培养与应用”中的第1个课题，旨在为学生实践其他的生物技术实验做好铺垫，又由于本节内容位于传统的发酵技术之后，所以它是在传统的生物实践技术的基础上发展起来的，同时又为微生物的应用奠定了基础，因此，可用“承前启后”这个词语来概括本课题的地位。教学重点：无菌技术的操作教学难点：无菌技术的操作教学过程导入在传统发酵技术的应用中

2、，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题微生物培养关键是1、提供营养和条件，2、防止污染一、培养基琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基中用作为凝固剂。1、培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离,鉴定,计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培

3、养化学组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生，产降低成本目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分离思考：硝化细菌的氮源、固氮生物的氮源、自养生物的碳源、异养生物的碳源分别是什么？2、培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含

4、有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。3、微生物生长条件：培养基除满足微生物生长的pH、特殊营养物质和氧气等要求。特殊营养物质：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。培养乳酸杆菌时需要添加维生素，培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸性，培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。二、无菌技术获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。1、无菌操作包括：思考：无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是防止感染实验操作者。（1）对实验操作空间、操作者的衣着

5、和手进行清洁和消毒；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。2、消毒方法：煮沸消毒；化学药物消毒；紫外线消毒。（1）日常生活经常用到的是煮沸消毒法；（2）对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法（作简要介绍）；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒。思考：物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高；

6、随后关闭排气阀继续加热，气压升至100kPa，温度为121℃，并维持15～30min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的液体暴沸。（4）实验操作者的双手使用酒精进行消毒；（5）饮水水源用氯气进行消毒。3、灭菌方法：（1）接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；（3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。（4）表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。4、消毒和灭菌比较（填表）比较项理化因素的

7、作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能三、实验操作一）、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算→称量→融化→调pH→灭菌→倒平板1、计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。2、称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。3、溶化：①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化钠继续加热；③加入琼脂；④用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。4、调pH：用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏

8、碱性。思考：①皿底和皿盖的大小关系？培养基是倒在那个上面？②“倒平板”中的“倒”字该如何理解？③培养基和培养皿的灭菌方法有何不同？为什么？④“倒平板”指的是接种前还是接种后，还是都要？5、灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎