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1、一、杏鲍菇(pleurotuseryngii)冷藏保鲜技术及自溶机理研究（巩晋龙2013福建农林大学）细胞壁物质成分(蛋白质、可溶性糖、几丁质、纤维素)的测定(1)细胞壁乙醇不容物(AIS)的制备：参照ZivanovicSetal.等[144]方法并做一些修改：取混匀后的样品组织200g于95%的乙醇溶液中浸提10min，然后煮沸5min，放置于室温下沉淀过夜，过滤，残渣用78%乙醇进行洗涤，过滤后60℃真空干燥过夜，置于干燥器中冷却至室温，干样经粉碎后过筛，即得乙醇不容物(AIS)。(2)细胞壁物质成分的测定：乙醇不容物(AIS)中可溶性蛋白质含量的测定参照考马斯亮蓝染色法[117]
2、，以标准牛血清蛋白溶液制作标准曲线。精确称取25mgAIS，加蒸馏水，浸提10min，12000×g离心20min，吸取1.0mL上清液于10mL容量瓶并定容至刻度。吸取1.0mL样品提取液，放入具塞试管中，加入5.0mL考马斯亮蓝G-250溶液，充分混合，放置2min后在波长595nm处比色测定其吸光度，重复3次，计算可溶性蛋白质的含量。乙醇不容物(AIS)中可溶性糖含量的测定采用苯酚-硫酸法[117]以标准蔗糖溶液制作标准曲线。精确称取25mgAIS于20mL具塞试管中，加入10mL蒸馏水，薄膜封口，沸水中煮沸提取30min，冷却、过滤，将残渣回收到试管中，加10mL蒸馏水，重复沸
3、水浴提取10min，过滤，洗涤，将滤液一并转入50mL容量瓶并定容至刻度。吸取1.0mL提取液于具塞试管中，加入1.0mL蒸馏水，1.0mL0.09g/mL苯酚溶液，摇匀，再加入5.0mL的浓硫酸，充分振荡后在室温下反应30min，在波长485nm处比色测定其吸光度，重复3次，计算可溶性糖的含量。乙醇不容物(AIS)中几丁质的测定方法参照傅海舰等[145]，以标准D-氨基葡萄糖盐酸盐溶液制作标准曲线。精确称取25mg于25mL容量瓶中，加入5mL2mol/L盐酸溶液溶胀，混匀后，冰水浴中加入15mL浓硫酸，沸水中煮沸30min，冷却至室温，去离子水定容至刻度。吸取水解液1mL与10mL
4、容量瓶中，依次加入1.0mL2%间苯二酚水溶液、7.5mL75%浓硫酸溶液，混匀，沸水浴加热30min，凉水冲至室温，定容，以空白作对照，在500nm处比色测定其吸光度，重复3次，计算几丁质含量。乙醇不容物(AIS)中纤维素含量的测定方法参照宁正祥等[146]以标准葡萄糖溶液制作标准曲线。精确称取0.5gAIS与烧瓶内，加入120mL2%盐酸溶液，回流煮沸3h，抽滤，用热水洗涤2~3次，抽干，再用乙醇和乙醚洗涤1次，低温烘干。用20mL80%硫酸溶液将其转移到锥形瓶内，摇匀，放置2h，加入300mL蒸馏水，置于沸水浴中加热5h，冷却，过滤至500mL容量瓶并用蒸馏水定容至刻度。取0.5
5、mL样品提取液加入25mL具塞刻度试管中，加1.5mL蒸馏水、0.5mL蒽酮-乙酸乙酯试剂和5.0mL浓硫酸，充分振荡，沸水浴加热1min，冷却至室温，在630nm处比色测定其吸光度，重复3次，计算纤维素含量。二、主要食用菌采后品质劣变机理及调控技术研究（姜天甲2010浙大）1细胞壁乙醇不溶物(alcohol-insolubleresidue,AIR)的提取乙醇不溶物(AIS)的制备参照Zivanovicetal.(2000)等的方法。细胞壁各组分抽提参照Sietsmaetal.(1981)的方法并做了些修改:取20omgAIS,用煮沸的蒸馏水15mL抽提Zh,提取溶液在4oc经130
6、00只g离心20min,收集上清液并定容至25mL得水溶性组分;取水不溶性沉淀,以IMNaoH溶液15mL在60OC下抽提20min,旋转离心,收集上清液并用冰醋酸将PH值调至7.0,定容至25mL得IMNaOH可溶性组分;取IMNaOH不溶残渣,以10MNaOH溶液15mL煮沸并抽提111,旋转离心,收集上清液并用冰醋酸将PH值调至7.0,定容至25mL得IOMNaOH可溶性组分;取IOMNaOH不溶残渣,以6MHel溶液smL煮沸并抽提4h,旋转离心后收集上清液,残渣用IMNaOH溶液10mL在60oC下抽提20mill,旋转离心并收集上清液,将这两部分上清液合并然后用水定容至25
7、mL得HCI/IMNa0H可溶性组分;剩余不溶物为残渣组分。2细胞壁物质成分的分离和测定乙醇不溶物(AIS),水溶性组分与1MNaoH可溶性组分中的可溶性蛋白含量参照Bradford(1976)的方法进行测定,以牛血清白蛋白制作标准曲线。吸取提取液一lmL于试管中,然后加入smL考玛斯亮蓝G一250试剂,混合均匀,放置5min后在595nm下比色测定吸光度,计算可溶性蛋白含量。乙醇不溶物(A工S)与所有组分中的可溶性糖含量测定采用葱酮比色法(曹
