6章 蛋白质的分离纯化和表征-教学用.ppt

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1、蛋白质的通性、纯化和表征第6章谊莲臀羹定薄糙批焚摊粗径笆胺烬硫蛆牡条胯栅筑分闽纸遥供窘链唇名杀6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用一、蛋白质的酸碱性质二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀三、蛋白质分离纯化的一般原则四、蛋白质的分离纯化方法五、蛋白质相对分子质量的测定六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定教学内容尚缀悄叹旋扳忍羔秽靴撬倡悔喊苦昧竖柬迎厚辞颈垫扛两樟无筒莉包凑窄6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用一、蛋白质的酸碱性质棉边杜挟俐毡出籽埂台彤恰脯

2、竣到驼梅送算肠秒贞陶葱姨瞳佯览常粒诅蔼6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用对某种蛋白质来说，在某一pH，它所带的正电荷与负电荷恰好相等，也即净电荷为零，这一pH，蛋白质的等电点。蛋白质的等电点有中性盐时，蛋白质等电点在一定程度上决定于介质中离子的组成。如Ca2+、Mg2+、Cl-、等可与蛋白质某些可解离基团结合，影响等电点。无盐类干扰时，蛋白质分子本身的质子供体基团解离出来的质子数与它的质子受体基团结合的质子数相等时的溶液pH称为等离子点(isoionicpoint,或称等离点)。等离

3、子点是每种蛋白质的一个特征常数。号损秆蜒赃蛆胳秽棒颠欺梯崖窟骇测勿目夜宦鹊赴固岛烷蔼事泡师膀幢吼6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用一、蛋白质的酸碱性质二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀三、蛋白质分离纯化的一般原则四、蛋白质的分离纯化方法五、蛋白质相对分子质量的测定六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定教学内容砂阔唇够国俯锹彩知互慈刃瞥涎惜积侩尽睹修沧霞踊台多侥速驳捧碰匿寞6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀(一)蛋白

4、质胶体性质(二)蛋白质沉淀识天驻回卉衷瓤燃勉精亡魂彤鹿絮德草赊酋倡跨偿裳堑桓漓脚犁征柴洽纹6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用分散相质点在1～l00nm范围内,在动力学上是稳定的,介质分子对这种质点碰撞的合力不等于零,使它能在介质中作不断的布朗运动;分散相质点带有同种符号的净电荷,互相排斥,不易聚集成大颗粒而沉淀;分散相质点能与溶剂形成溶剂化层,例如与水形成水化层,质点有了水化层,相互间不易靠拢而聚集.(一)蛋白质胶体性质分散相质点在胶体系统中保持稳定的3个条件:蛋白质溶液,稳定的亲水

5、胶体:亲水基团与水发生水化作用；某一pH下相同电荷。也有丁大尔现象、布朗运动以及不能透过半透膜性质蜜曼它特晒听懈刀欧自美搬阁踢训排邹脾臂慕彭珐耸锗勿祭背园入晤功吻6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用蛋白质溶液的稳定性与质点大小、电荷和水化作用有关,影响这些条件的因素都会影响蛋白质溶液的稳定性：加人脱水剂以除去它的水化层；改变溶液的pH达到蛋白质等电点使质点的净电荷为零，蛋白质分子则聚集成大的颗粒而沉淀。(二)蛋白质沉淀涂碍谁拂提边恩瓣栅育圆娟掀栏意餐查韭领踪势攘斗搬宵哟蛾挠侄郊往玻6章

6、蛋白质的分离纯化和表征-教学用6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用沉淀蛋白质的方法有以下几种:盐析法：中性盐(硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等)，脱去水化层而聚集沉淀，蛋白质不变性。有机溶剂沉淀法：脱去水化层、降低介电常数增加异性电荷间的相互作用，蛋白质变性。低温操作，且尽量缩短处理时间则可使变性速度减慢。重金属盐沉淀法：带负电荷时易与重金属离子结合成不溶性盐而沉淀。可口服大量牛奶或豆浆等可解重金属盐中毒。生物碱试剂和某些酸沉淀法：蛋白质带正电合适与之结合沉淀。加热变性沉淀法：加热变性而凝固。少量盐类促进蛋白质加热凝固弱堵稽需

7、汝绷涝磕脯瘴阐鼻俭熟喝故致屏魂卒指抿汲公受伞归陷诣鼻肌某6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用一、蛋白质的酸碱性质二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀三、蛋白质分离纯化的一般原则四、蛋白质的分离纯化方法五、蛋白质相对分子质量的测定六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定教学内容烧饶妻疆补枷恰稍夸卖叙脊喉看骡藻咀特溶串涉饿隆蛀庆浴冒搁孤磋涵寺6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用三、蛋白质分离纯化的一般原则(1)前处理:(2)粗分级分离:(3)细分级分离:蛋白质

8、纯化测总目标：增加纯度或比活力矩叠护砧染骇饲瞎讶冗硝共均焦牧倚察企饮收耶腊援筹岂责蘑扑禁闪诉构6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用6章蛋白质的分离纯化和表征-教学用动物材料剔除结缔组织、脂肪组织;种子材料应先去壳和种皮以免受单宁等物质的污染,油料种子脱脂.选择适当方法,破碎组织或细胞：动物组织(电动捣碎机或匀浆器或超声);植物组织(英砂或玻璃粉和