试验-脑脊液检验.ppt

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1、脑脊液检验实验一脑脊液理学检查（目的）掌握脑脊液理学检查的内容，方法。（标本）新鲜脑脊液。（操作）1．观察颜色肉眼观察脑脊液颜色变化，分别以无色，乳白色，红色，棕色，或黑色，绿色等文字如实描述报告。2．观察透明度肉眼观察脑脊液透明度变化。正常脑脊液清晰透明，病理情况下可出现不同程度浑浊，可分别以“清晰透明”。“微浑”，“浑浊”等如实报告。3．观察凝块或薄膜轻轻倾斜试管，肉眼仔细观察有无凝块或薄膜。正常脑脊液无凝块或薄膜，脑膜炎时可形成凝块或薄膜，分别以“无凝块”，“有凝块”，“有薄膜”等如实报告。（注意事项）当标本颜色或透明度改变不明显时，

2、应在灯光下以白色或黑色为背景仔细观察，同时观察有无凝块。怀疑为结核性脑膜炎时，标本应在2~4℃环境中静置12~24h再观察脑脊液表面有无薄膜形成。参考值：无色，清晰透明，放置后无凝块或薄膜形成。实验二脑脊液显微镜检查（目的）掌握脑脊液显微镜检查的内容，方法。（器材）显微镜，改良牛鲍计数板，微量吸管。刻度吸管，小试管。（试剂）生理盐水或红细胞稀释液，冰乙酸，白细胞稀释液，瑞氏染液或瑞—吉染液。（标本）新鲜脑脊液。（操作）细胞总数计数直接计数法（适用于清晰透明或微浑脑脊液）充池：微量吸管吸取混匀的脑脊液，充入血细胞计数板的上下2个计数池。计数：

3、静置2~3min，低倍镜下计数2个计数池内四角和中央大方格共10个大方格内的细胞数。计算：10个大方格内的细胞总数即为每微升脑脊液细胞总数，再换算稀释计数法（适用于浑浊的脑脊液）稀释：如标本细胞过多，可根据标本内细胞多少，用生理盐水或红细胞稀释液对标本进行一定倍数稀释。充池：用微量吸管吸取混匀后的稀释脑脊液充入1个计数池。计数：静置2~3后，低倍镜计数1个计数池内四角和中央大方格共5个大方格内的细胞数。计算：根据5个大方格内细胞总数及稀释倍数，计算每升脑脊液的细胞总数。白细胞计数直接计数法（非血性清晰透明或微浑脑脊液）除去红细胞：在小试管内

4、加入冰乙酸1~2滴，转动试管，使内壁粘附少许冰乙酸后倾去，滴加混匀的脑脊液3~4滴，混匀，放置数分钟，使红细胞破坏。充池：计数：计算：稀释计数法（浑浊脑脊液）稀释破坏红细胞：根据标本内白细胞多少情况，用白细胞稀释液对标本进行一定倍数的稀释，混匀，放置数分钟，破坏红细胞。充池：用微量吸管吸取混匀稀释后的脑脊液充入1个计数池。计数：静置2~3min后，低倍镜计数1个计数池内的四角和中央大方格内的白细胞数。计算：根据5个大方格内的白细胞总数和稀释倍数，计算每升脑脊液的白细胞总数白细胞分类计数直接分类法白细胞计数后，转换高倍镜，根据细胞的形态和细胞

5、核形态进行直接分类，共计数100个白细胞（包括内皮细胞），分别计数单（个）核细胞（包括淋巴细胞，单核细胞，内皮细胞）和多（个）核细胞（粒细胞系）的数量，结果以单核细胞百分比和多核细胞百分比报告。如白细胞不足100个，可直接写出单核细胞和多核细胞具体数，若白细胞数不足30个，可不做直接计数而改用涂片染色分类计数涂片染色分类法若直接分类不易区别细胞时，可将脑脊液以1000r/min离心5min，取沉淀物，制成均匀薄片，置于室温或37℃恒温箱内尽快干燥，瑞氏或瑞—吉染色后，油镜下进行分类计数，结果报告与血液白细胞分类计数报告方式相同。若见激活型单

6、核细胞（比普通单核细胞大，胞质边缘趁、呈花边状，胞质内有空泡），转化型淋巴细胞（形态似异型淋巴细胞）及室管膜细胞（形态似大淋巴细胞）应计入分类的百分比中（注意事项）直接白细胞计数时，也可用微量吸管吸取冰乙酸后尽可能全部吹出，仅使吸管内壁粘附少许冰乙酸，再吸取少量混匀的脑脊液于吸管中，数分钟后吸管内红细胞溶解，然后再充池计数。细胞计数时，如发现较多红细胞有皱缩或肿胀等异常现象，应如实报告，以协助临床医生鉴别是陈旧性出血或新鲜出血。血性脑脊液中的白细胞必须校正后才有价值白细胞校正数=脑脊液白细胞未校正数—脑脊液红细胞数×血液白细胞数/血液内红细

7、胞数细胞涂片时，为了使细胞容易粘在玻片上，可取沉淀的细胞悬液2滴，加血清1滴，混匀后涂片。涂片染色分类时，如见内皮细胞或异常细胞，则另行描述报告，必要时用巴氏或HE染色查找肿瘤细胞。实验结束后，血细胞计数板用0.75％（V/V）乙醇浸泡消毒60min，忌用酚浸泡，以免损坏计数板。方法学评价脑脊液细胞计数和分类目前一般任用手工显微镜法。白细胞直接分类法简单，快速，但属粗略分类，其准确性差，且细胞较小，初学者难把握，尤其是陈旧性标本的细胞变形，分类更困难，误差较大。涂片染色分类法分类详细，结果准确可靠，尤其是可以发现异常细胞如肿瘤细胞。该法被推

8、荐使用，但其操作较复杂，费时。血液分析仪也可进行脑脊液细胞计数和白细胞分类，此法简单，快速，但标本尤其是病理性，陈旧性标本中的组织，细胞的碎片以及细胞变形等都可以影响细胞分类和计