植物组织培养实验教学.pptx

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1、植物组织培养北京市第四中学陈月艳一、课程标准对于本实验的要求具体内容标准活动建议选修三简述植物的组织培养选修一尝试植物组织养用组织培养法培养花卉等幼苗，并进行露地栽培。二、教材中实验内容安排菊花外植体培养试管苗的移栽（人教）试管苗的发芽试管苗的生根培养（浙科）三、课程实验内容的安排及思考(一）内容安排要体现植物组织培养技术特色1.植物组织培养意义2.植物组织培养技术性3.教学实践可行性4.选修1和选修3教学内容的合理整合①②③④⑥⑤⑥（二）课时安排：植物组织培养理论讲解：１.5课时实验教学（教师有所选择）：培养基配置：1课时外植体接种：1课时试管苗的扩大繁

2、殖或生根培养：１课时试管苗的移栽：1课时三、实验教学具体技术操作问题（一）实验仪器和试剂1.实验室:洗涤室、无菌室、试管苗培养室、温室2.仪器:超净工作台、高压灭菌锅、培养瓶、酒精灯、培养皿或无菌包、镊子、剪刀、解剖刀、广口瓶、火柴、标签、废物缸、酒精棉、试剂瓶、容量瓶、天平、移液管或移液器。3.试剂:配培养基所需各种化学试剂（包括激素）、75%酒精、无菌水（用于外植体接种）、10%次氯酸钠（或0.1%氯化汞）、pH试纸或pH测定仪接种用无菌包制作（二）提前准备1.实验材料外植体的选择(非洲紫罗兰、矮牵牛、菊花）或者数量较多的用于扩繁或生根的试管苗（见陈月

3、艳论文）菊花：外植体接种一个月后可得到试管苗非洲紫罗兰：2个月（较慢）矮牵牛：三个星期，扩繁速度快2.培养基配置(若微生物实验已尝试过培养基配置,可由教师配置)最常用MS培养基（Murashige和Skoog设计）有机物甘氨酸2盐酸硫胺素0.4盐酸吡哆素0.5烟酸0.5肌醇100蔗糖30000琼脂6000-10000pH5.8单位：mg/L大量元素NH4NO31650KNO31900KH2PO4170MgSO4.7H2O370CaCl2.2H2O440微量元素MnSO4.4H2O22.3ZnSO4.7H2O8.6H3BO36.2KI0.83Na2MoO4.

4、2H2O0.25CuSO4.5H2O0.025CoCl2.6H2O0.025FeSO4.7H2O27.85Na2-EDTA37.25母液配置*意义*母液种类（母液浓缩倍数依据需要而定）大量元素（10倍）、微量元素、铁盐、有机物（100倍）激素*需要注意问题：难溶试剂可适当加热微量物质称取困难的解决方法配置激素母液的溶剂NAA（萘乙酸）母液（50mg/100ml）配制：*称取NAA50mg置于100ml烧杯中*在烧杯中加入1—3ml95%酒精*将烧杯在热水浴中水浴加热，搅拌*NAA完全溶解后，一滴滴向溶液中加蒸馏水，边滴边搅拌（不可加入一次过多蒸馏水，否则容

5、易出现沉淀）*当蒸馏水加至40ml以上时，可快速加入蒸馏水，并倒入容量瓶中定溶至100ml。*贴标签标明激素名称、浓度、配置日期6BA（6卞基腺嘌呤）配置（同上）：*称取NAA50mg置于100ml烧杯中*在烧杯中加入1—3ml稀盐酸*将烧杯在热水浴中水浴加热，搅拌*NAA完全溶解后，一滴滴向溶液中加蒸馏水，边滴边搅拌（不可加入一次过多蒸馏水，否则容易出现沉淀）*当蒸馏水加至50ml以上时，可快速加入蒸馏水，并倒入容量瓶中定溶至100ml。*贴标签标明激素名称、浓度、配置日期琼脂混合水煮沸蔗糖母液调pH分装灭菌NaOHHCl用母液配置培养基无菌包、无菌水、

6、接种室和超静工作台紫外灯消毒紫外消毒提前半小时完成，学生接种操作时一定关闭。（三）接种和移栽实验操作取外植体消毒切割培养接种⑴外植体接种外植体：清洗消毒软刷（如毛笔）清洗外植体用70%酒精消毒30s，冲洗0.1%HgCl2消毒5～7min（或10%次氯酸钠消毒5～15min）无菌水冲洗多次以叶片为外植体培养矮牵牛以鳞片叶为外植体培养百合以根为外植体培养国兰取新生苗茎段进行组培以菊花茎段为外植体细胞分裂素多生长素少细胞分裂素和生长素比例相当细胞分裂素少生长素多愈伤组织⑵试管苗的扩繁或生根可同时准备扩繁和生根培养基，同台同学分工合作。可行、成本低的实验材料矮牵

7、牛、菊花、百合、非洲菊等①②③④⑤⑥⑦⑶试管苗的移栽和管理关注后期管理（四）实验安全问题！！！！！1.紫外消毒提前半小时,紫外灯有明显标识!!2.酒精消毒和酒精灯使用安全3.解剖刀等器械使用4.消毒试剂(HgCL2)应用五、评价方式⑴完成实验报告（可由教师设计和编制），报告具体内容体现对植物组织培养技术理论基础和操作原理的考察，学生实验过程和结果的记录、反思与分析等。⑵学生实验研究成果展示。⑶可根据学生实际情况，安排学生自己设计培养基培养某一生物材料，或者进行和植物组织培养有关的其他研究性学习课题。