课题2　月季的花药培养 (3).pptx

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1、月季的花药培养花中皇后月季又称“月月红”，自然花期5至11月，开花连续不断，通常扦插就可以成活。1964年，印度科学家在培养茂业曼陀罗的花药时，首次获得了由花药中的花粉粒发育而来的单倍体植株。说明生殖细胞和体细胞一样，在离体条件下也具有发育成完整植株的潜能。自20世纪60年代以来，世界上已有250多种高等植物的花药培养获得成功。我国已经培育成功近50种植物的花粉再生植株，如小麦、玉米、大豆、甘蔗、橡胶等。知识回顾单倍体育种的过程？花药离体培养（N）单倍体植株（N）秋水仙素处理，使染色体翻倍植株（2N）特点：1明显缩短育种年限2后代植株都为纯合子。正常植株（2N）课题背景花丝花药：

2、囊状结构，内有很多花粉（一）被子植物的花粉发育1雄蕊一、基础知识2花粉的概念:由花粉母细胞经过减数分裂形成的单倍体的生殖细胞.花粉发育过程花粉母细胞（小孢子母细胞）4个小孢子减数分裂小孢子四分体1个小孢子（单细胞花粉粒）花粉粒（双核）有丝分裂单核双核小孢子母细胞花粉母细胞小孢子减数分裂有丝分裂花粉管细胞核生殖细胞核有分丝裂精子营养细胞生殖细胞（小孢子四分体时期单核居中期单核靠边期双核期）小孢子母细胞小孢子花粉囊花药花粉粒（双核期）成熟花粉活动1：阅读“被子植物的花粉发育”，回答下列问题：1．花粉是___倍体的_______细胞.被子植物的花粉是在中由经过分裂形成的。2．花粉的发育

3、要经历不同的时期：减数单生殖（）分裂（）分裂小孢子母细胞（2n）（）时期（n）单核（）期（n）双核期（）细胞核（n）（）细胞核（n）（）细胞（n）（）细胞（n）（）个精子(n)单核（）期（n）（）分裂减数小孢子四分体靠边有丝居中生殖营养花粉管2生殖有丝花药花粉母细胞（二）产生花粉植株的两种途径①②移栽花药中的花粉胚状体脱分化愈伤组织花药中的花粉脱分化分化丛芽再分化丛芽诱导生根原因：培养基中的激素种类及浓度配比胚状体——在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似；神奇的人工种子:通过胚状体途径形成小植株烟草花药培养胚状体发育途径愈

4、伤组织转接种到再生培养基愈伤组织分化形成再生植株水稻花药培养愈伤组织发育途径部分花药产生愈伤组织接种在平板上的水稻花药不同植物的诱导成功率很不相同，就同一种植物来说亲本的生理状况对诱导成功率也有直接影响。②选择合适的花粉发育时期是提高诱导成功率的重要因素。因为并不是任何时期的花粉都可以经过培养产生愈伤组织或胚状体，花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感。①选材是否成功是花药培养成功的关键。三、影响花药培养的因素1、材料的选择：一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养的成功率最高。即：最适合花药培养的时期为单核靠边期。选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，

5、极易破碎；选择单核期之后的花药接种，花瓣已有些松动，又给材料的消毒带来困难，且难以挑选到单核期的花药。③花药培养时期的选择④其它时期选择的缺点为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。盛开的或略微开放的花，都不宜选作实验材料。⑥选择完全未开放花蕾的原因完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花药，菌少、易消毒⑤挑选单核期花药的方法⑦花药培养时间一般月季的花药培养时间选在5月初到5月的中旬，即月季的初花期。初花期的花蕾营养状态及生理状态会比较好，可提高花粉的诱导成功率。花药培养所采用的培养基各成分中植物生长调节剂的水平和配比起决定作用。⑴诱导愈伤组织或胚状体产生的培养基：广泛使用

6、2，4-D、IAA；⑵诱导分化的培养基常除去2，4-D而以IBA代之。亲本植株的生长条件、材料的低温预处理、接种密度等对诱导成功率都有一定的影响。2、培养基的组成：3、其他因素：为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？讨论：（一）材料选取2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色)焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。1、从花药看：月季的初花期从花粉看：单核期从花蕾看：完全未开放的花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜

7、检（花粉粒的细胞核被染成红色）花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）四、实验操作（二）材料的消毒5、无菌水冲洗3～5次花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒2、无菌水清洗3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟（质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药②要彻