血清总蛋白测定(双缩脲试剂法).doc

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1、..生物化学实验报告姓名:学号:专业年级:组别:.下载可编辑...生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称血清总蛋白测定(双缩脲试剂法)实验日期2014-11-21实验地点第五实验室合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1、掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理、操作;2、熟悉血清总蛋白的临床意义;3、了解双缩脲法测定血清总蛋白的特点和注意事项。二、实验原理(一):双缩脲反应在碱性溶液中,双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲(H2N-OC-N

2、H-CO-NH2),因分子内含有两个邻接的肽键,在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲反应,生成紫红色络合物;蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键(-CO-NH-),同样能在碱性条件下与Cu2+发生双缩脲反应,生成的紫红色络合物,且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10~120g/L范围内有良好的线性关系。三、材料与方法:实验材料样品:大牛血清试剂:双缩脲试剂、蛋白质标准液(70g/L)、生理盐水(0.9%)器材:试管、加样枪、刻度吸管、洗耳球.下载可编辑...设备:1100分光光度计、水浴锅实验步骤取3支试管,做好标记(B空白对照,S标准液,U为待

3、测大牛血清),按下表操作:加入物(ml)B(空白)S(标准)U(待测)大牛血清(1:10)--0.5蛋白标准液(1:10)-0.5-0.9%氯化钠溶液0.5--双缩脲试剂4.04.04.0a.各管混匀,观察各试管颜色b.将各试管置于37℃水浴锅中加热20min,观察颜色c.将试管中的液体倒入比色杯中,置于1100分光光度计的样品槽内,在波长540nm,以空白管调零,测S和U管吸的光度。d.测定结束后,将比色杯中的样品回收进试管依据公式算出结果三、结果与讨论:(一):实验结果1、实验现象:a、在实验中首先加入双缩脲试剂,再依次加入0.9%氯化钠溶液

4、、蛋白质标准液、.下载可编辑...相应的大牛血清后溶液没有明显的颜色变化,呈淡蓝色透明状;a、水浴20分钟之后,B试管试管显淡蓝色;S试管和U试管显浅紫色且S试管的颜色比U试管的颜色稍深。2、实验数据:管号测定次数平均吸光度123S0.1870.1880.1870.1873U0.1200.1190.1190.11933、结果计算:将大牛血清和蛋白标准液的平均吸光度带入公式:血清总蛋白(g/L)=(Au/As)X蛋白质标准液浓度(g/L),得出结果:血清总蛋白=44.586g/L(二):结果讨论查阅资料得知,大牛血清总蛋白含量一般为60-80g/L

5、,可是,实验结果却是44.586g/L,即使按照实验要求及步骤操作,结果还是出现了比较大的误差,实验结果经过讨论,分析如下:1、成功的方面:a.在本次试验出现了预期的结果:S和U试管溶液显淡紫色,B试管显淡蓝色。S和U试管显淡紫色是因为蛋白质发生了双缩脲反应,但是由于蛋白质的含量偏少显色较浅,B试管显浅蓝色的原因是B试管中没有发生任何反应,显双缩脲试剂的淡蓝色。b.水浴,吸光度测试等环节都能够按照预定的步骤进行,操作比较严谨。2、误差分析:a.所测得的蛋白质含量偏低,可能是由于样品存储不当,造成待测的大牛蛋白水解,待测样品中的蛋白质总量本身就很低

6、.下载可编辑...a.待测的大牛蛋白溶液正常,但是,标准蛋白溶液的浓度比标示的高,造成测量结果偏低b.操作过程有偏差,由于量取蛋白质溶液的量比较少,在每个加样步骤的少量偏差,都会造成结果误差较大五:结论样品的蛋白质含量偏低复习思考题1.什么叫双缩脲试剂?为什么要在双缩脲试剂中加入酒石酸钾钠和碘化钾?双缩脲试剂2.试剂配制过程中,为何NaOH要单独配制,最后加入?3.简述血清总蛋白测定的临床意义。.下载可编辑.

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