植物组织中丙二醛含量的测定.ppt

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1、植物组织中丙二醛含量的测定一原理植物器官在逆境条件下或衰老时,往往发生膜脂过氧化作用,丙二醛(MDA)是其中产物之一,通常将其作为脂质过氧化指标,用于表示细胞膜脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强弱。丙二醛(MDA)硫代巴比妥酸(TBA)高温酸性三甲基复合物(3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮)(红棕色)上述反应在532nm处有最大吸收波长但此反应受可溶性糖的极大干扰：糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收(糖与TBA反应产物的最大吸收波长在450nm处)＋所以，测定MDA含量时需排除可溶性糖的干扰根据Lambert-Beer定律,

2、对最大吸收光谱不同的两个组分的混合液,代入数值，计算得出混合液中两种组分的浓度公式：可溶性糖：C1/(mmol/L)=11.71OD450MDA：C2/(μmol/L)=6.45OD532－0.56OD450二材料、仪器设备及试剂(一)材料植物叶片(经逆境条件处理)(二)仪器设备研钵,试管,移液管,恒温水浴锅,离心机,分光光度计(三)试剂10%三氯乙酸(TCA)0.6%硫代巴比妥酸(TBA)三实验步骤(1)MDA的提取取0.5g叶片剪碎,加10%TCA2ml和少量石英砂,研磨；进一步加入3mlTCA充分研磨,匀浆液以4000r/min下离

3、心10min,上清液即为提取液。(2)显色反应及测定吸取上清液2ml,加2ml0.6%TBA,混匀,在沸水浴中煮沸15min,迅速冷却,在4000r/min下离心5min。取上清液测定532nm和450nm下的OD值。对照以2mlTCA代替提取液。(3)计算按公式计算MDA的含量(μmol/g):MDA含量(μmol/g)=MDA的浓度(μmol/L)×提取液总体积(0.005L)×稀释倍数（2）÷质量(0.5g)=C2×0.02四注意事项取上清液时要小心，不要将沉淀取出使用离心机时,一定要注意平衡.返回