紫外可见分光光度计的介绍及使用.ppt

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1、紫外可见分光光度计主要内容1仪器构成及原理2分光光度计的使用波长扫描定量测定3注意事项一仪器原理紫外可见吸收光谱主要产生于分子价电子在能级间的跃迁。利用一定频率的紫外--可见光照射被分析的物质，引起分子中价电子的跃迁，它将有选择地被吸收。吸收光谱可以反映出物质的特征。物质对光的选择性吸收－溶液对光的作用溶液对光的作用示意图I0入射光辐射强度I透射光辐射强度T透射比a吸光系数ε摩尔吸光系数光吸收遵循朗伯-比尔定律：溶液对光吸收示意图溶液对光吸收过程偏离朗伯比尔定律的原因-化学因素朗伯-比尔定律的假设条件一：入射光为单色光。朗伯-比尔定律的假设条件之二：吸收

2、粒子是独立的，彼此之间无相互作用。比尔定律适用于稀溶液。吸光组分的化学变化：吸光组分的缔合、离解，互变异构，络合物的逐级形成，以及与溶剂的相互作用等，都将导致偏离比耳定律。组成：光源、单色器，狭缝、样品池、检测器1．光源：①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用寿命长，价格低。 钨灯——可见光区320～2500nm氢灯或氘灯——紫外光区195－375nm组成2．单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件单色器是分光光度计的心脏部分，它的作用是把来自光源的混合光分解为单色光并能随意改变波长。它的主要组成

3、部件和作用是：①入射狭缝——限制杂散光进入。②色散元件——即棱镜或光栅，是核心部件，可将混合光分解为单色光。 ③准直镜——把来自入射狭缝的光束转化为平等光，并把来自色散元件的平等光聚焦于出射狭缝上。④出射狭缝——只让特定波长的光射出单色器。3.吸收池玻璃——由于吸收紫外UV光，仅适用于可见光区；石英——适用于紫外和可见光区4．检测器：将光信号转变为电信号的装置光电管光电倍增管二极管阵列检测器5．记录装置：讯号处理和显示系统开始程序启动方法设定按钮扫描范围读数方式扫描速度样品名输入按钮将空白样品分别放入参比池和样品池进行用户基线校正按钮将样品放入样品池开

4、始测量按钮开始测量打印数据按钮打开数据处理界面数据检索峰值检出图谱平滑、求导二波长扫描启动UVSolution软件打开仪器主机电源。用鼠标点击Windows开始菜单中的[HitachiApplications]选项中的[UVSolutions2.0]选项。或者直接在桌面上双击UVSolution图标。2运行UVSolution软件。软件将自动配置计算机的串行口（RS232Port）见图仪器在初始化过程中进行如下自检工作：ROM检测RAM检测波长步进电机运转检测氘灯点亮检测钨灯点亮检测仪器波长校正3仪器主机开始初始化。见图仪器主机初始化完毕，进入工作状态。

5、测量参数设置1在[Edit]菜单中选择[Method…]选项，或按按钮。出现下列窗口。General:总体设置页面Measurement测量:Wavelengthscan波长扫描Timescan时间扫描Photometry定波长测量Operator操作者:输入操作者的姓名Instrument仪器:仪器型号由软件自动从仪器主机获得。UseSampleTable使用样品表:选择是否使用样品表。Comments备注:填写一些备注信息。[Load]按钮:用于装载原来保存的方法文件。[Save]按钮:保存当前的设置参数。[SaveAs]按钮:将当前设置参数另存为一

6、个方法文件。Instrument仪器参数设置页面Datamode读数显示方式，选择Abs吸光度，波长扫描的起止范围一般为190-800，狭缝值一般为2Light一般选择“Auto”Monitor显示页面Processing数据处理页面Report报告结果页面样品名设置，备注信息及文件名输入基线校正用户基线校正方法：可将scanspeed设小一些；进行样品扫描时，可设大一些。将空白样品分别放入样品室的参比光路和样品光路。按按钮系统基线校正方法。使用空气作为参比和样品。按按钮出对话框见图，选择System后按[OK]按钮，进行系统基线校正。测　　量有两种方法

7、可以开始测量：使用菜单方式选择[Spectrophotometer]菜单下Start]选项开始测量使用按钮方式：按按钮　开始测量如果要终止扫描按按钮　。二光度扫描开始程序启动方法设定按钮样品名输入按钮将空白样品分别放入参比池和样品池将样品放入样品池开始测量按钮开始测量打印数据按钮打开数据处理界面进行用户基线校正按钮定量测量设置波长输入标样测量参数设置在[Edit]菜单中选择[Method…]选项。出现下列设置窗口.具体操作程序Method:general:Measurement测量方式选择Photometry（光度计测量）Quantitation定量参数

8、设置页面：在measure中选择波长wavelength，在Calibratio