实验三 细菌的革兰氏染色.ppt

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1、革兰氏染色法实验三一、实验目的与要求:1、了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性2、学习并掌握革兰氏染色法二、实验原理：革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出

2、，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。三、实验仪器及材料1.仪器：显微镜、酒精灯等2.实验材料：菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌染色剂：草酸铵结晶紫染液、碘液、番红、95%乙醇四、内容与方法1.涂片2.晾干3.固定4.结晶紫染色：加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1分钟；5.水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。6.媒染：碘液，媒染1min；7.水洗：用水洗去碘液。8.脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色

3、10s-18s至流出液无色，立即水洗。9.复染：滴加番红复染1min；10.水洗：用水洗去涂片上的番红染色液。11.晾干：将染好的涂片用吸水纸吸干。12.镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。革兰氏染色流程图涂片干燥结晶紫染色碘液媒染水洗95%酒精脱色水洗番红染色水洗晾干镜检1分钟10秒1分钟固定水洗1分钟注意事项：1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。2.菌龄也有影响。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革

4、兰氏阳性菌转呈阴性反应。3.不要涂片太厚，会造成假阴性或假阳性。五、实验结果：紫色菌：革兰氏阳性菌红色菌：革兰氏阴性菌六、思考题1.你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？2.现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应，你怎么运用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为对照菌株进行涂片染色，以证明你的染色结果正确。