PBS缓冲液的配方.doc

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1、PBS缓冲液的配方发布日期:2008-11-11热门指数:865PBS是最普遍不过的实验室缓冲液,但其配方各异。以下是我的总结:母液的配制:0.2MNa2HPO4:称取71.6gNa2HPO4-12H2O,溶于1000ml水0.2MNaH2PO4:称取31.2gNaH2PO4-2H2O,溶于1000ml水各种浓度PB(pH=7.4)的配制:先配0.2MPB(pH=7.4,100ml):取19ml0.2mol/L的NaH2PO4,81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可。然后只需将0.2MPB(pH=7.4)按相应比例适当稀

2、释即可,如:0.1MPB(PH=7.4):取500ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。0.01MPB(PH=7.4):取50ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。0.02MPB(PH=7.4):取100ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。若需要NaCL的话,加入NaCL至0.9%(g/100ml)即可。另:其它各种另PH值的0.2MPB(100ml)配方:pH0.2MNaH2PO4(ml)0.2MNa2HPO4(ml)5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156

3、.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.50.57.88.591.57.97938.05.394.7分子生物学常用溶液配制发布日期:2008-8-25热门指数:3471分子生物学常用溶液配制一、分子生物学常用贮存液的配制1.30%丙烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1gN,N’-亚甲双丙烯酰

4、胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml。用滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌过夜,然后用Whatman1

5、号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。2.40%丙烯酰胺【配制方法】把380g丙烯酰胺(DNA测序级)和20gN,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。3.放线菌素D溶液【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml100%乙醇中,1:10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D(分子量

6、为1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃。【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液【配制方

7、法】在0.8ml水中溶解60mgATP,用0.1mol/LNaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃5.10mol/L乙酸酰溶液【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。6.10%过硫酸铵溶液【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。7.BCIP溶液【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃8.2×BES缓冲盐溶液【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水

8、溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6gNaCl和0.027gNa2HPO4,室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。9.1mol

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