实验25血球计数板的使用.ppt

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1、血球计数板的使用———计数酵母菌主讲人：聂健清放大后的计数池血球计数板血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器。血球计数板的结构血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。血球计数板上的数字表示什么？每个大方格边长为1mm，故每个大方格面积为1X1=1mm2。所以每个小方格的体积为1/400mm2。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高度为0.10mm,那么计数室的体积即为0.1X1X1=0.1mm3=10-4ml,。XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板的计数室分25个中格。血球计数板的使用——以计数酵母菌为例一、实验目的二、实验

2、原理三、实验器材四、实验步骤五、实验结果六、讨论、分析一、实验目的1、掌握血球计数板的使用原理和操作步骤。2、学会使用血球计数板进行准确计数。二、实验原理1、血球计数板的结构原理2、血球计数板的计数原理三、实验器材血球计数板盖玻片显微镜稀释10倍的酵母菌溶液四、实验步骤（1）镜检计数室。在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数。（2）加样品。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入。一次性充满计数室，防止产生气泡，多余培养液可用滤纸吸去。移动盖玻片至计数室

3、中央。（3）计数。稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。****注意点：1、不同规格计数板有不同计数要求#####25格x16格16格x25格2、对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。3、计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算。对每个样品可计数三次，再取其平均值。计算公式(1)25格x16格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞

4、个数/80×400×104（×稀释倍数）#####1大格=25中格一个中格=16小格****1大格=16中格一个中格=25小格(2)16格×25格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104（×稀释倍数）通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先______后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有_________个。（参考答案：5×400×10000×1

5、0＝2×108）练一练稀释2×108Task：以小组为单位（2人一组），根据以上实验原理、步骤，来计数酵母菌细胞数。计数3次求平均值，汇报实验结果。（血球计数板规格：25x16）五、实验结果将结果记录于表中第一次第二次第三次第四次总数平均值六、讨论、分析血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？如何减少这些误差？作业1、完成实验报告册；2、完成讨论中的思考题。谢谢~技术误差固有误差仪器误差计数域误差（系统误差）（分布误差）误差来源器材处理、使用不当，稀释不准确，细胞识别错误；仪器（计数板、盖片、吸管等）不够准确与精密；细胞分布不均匀等。技术误差、仪器误差可通过规

6、范操作、提高熟练度和校正仪器而避免或纠正。例如：对使用器材（计数板等）应注意清洁干燥、校正；加样时要让细胞沉降到计数室底，还要一次性充满计数室，防止气泡的产生；稀释酵母菌悬液和使用计数板的操作过程要严格执行；数细胞时要牢记“三个注意点”即注意计数板的规格，注意“数上不数下，数左不数右”的原则，注意求平均数。。。。。。（4）血球计数板的清洁血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。