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时间:2020-03-04
《Restrictive endonuclease及其保护碱基.doc》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、引物设计保护碱基表克隆PCR产物的方法之一,是在PCR产物两端设计一定的限制酶切位点,经酶切后克隆至用相同酶切的载体中。但实验证明,大多数限制酶对裸露的酶切位点不能切断。必须在酶切位点旁边加上一个至几个保护碱基,才能使所定的限制酶对其识别位点进行有效切断。有研究者使用了15种限制酶,分别比较了各种限制酶在其酶切位点旁边分别加0、1、2、3个保护碱基后的切断情况。结果显示,基本上所有限制酶,在其酶切位点旁边加上3个以上的保护碱基后,可以对其酶切位点进行有效切断。一般来讲,在酶切位点前加入两个GC碱基,因为如果保护碱基为AT的话,保护碱基在PCR产物的末端,AT
2、之间只有两个氢键,结合力差,容易在末端产生单链,这样的话限制性内切酶就无法作用。其实加保护碱基的多少,是具体情况具体讨论,比如HindIII、BamHI等就得有三个保护碱基。少了一个就无法切动。ApaI (类型:TypeIIrestrictionenzyme ) 识别序列:5'GGGCC^C3'BamHI(类型:TypeIIrestrictionenzyme ) 识别序列: 5'G^GATCC3'BglII (类型:TypeIIrestrictionenzyme ) 识别序列:5'A^GATCT3'EcoRI (类型:TypeIIrestrictionen
3、zyme ) 识别序列:5'G^AATTC3'HindIII(类型:TypeIIrestrictionenzyme ) 识别序列:5'A^AGCTT3'KpnI (类型:TypeIIrestrictionenzyme ) 识别序列:5'GGTAC^C3'NcoI (类型:TypeIIrestrictionenzyme ) 识别序列:5'C^CATGG3'NdeI (类型:TypeIIrestrictionenzyme ) 识别序列:5'CA^TATG3'NheI (类型:TypeIIrestrictionenzyme ) 识别序列:5'G^CTAGC3
4、'NotI (类型:TypeIIrestrictionenzyme ) 识别序列:5'GC^GGCCGC3'SacI (类型:TypeIIrestrictionenzyme ) 识别序列:5'GAGCT^C3'SalI (类型:TypeIIrestrictionenzyme ) 识别序列:5'G^TCGAC3' SphI (类型:TypeIIrestrictionenzyme ) 识别序列:5'GCATG^C3'XbaI (类型:TypeIIrestrictionenzyme ) 识别序列:5'T^CTAGA3'XhoI (类型:TypeIIre
5、strictionenzyme ) 识别序列:5'C^TCGAG3'
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