紫花地丁产木犀草素内生真菌的分离鉴定.pdf

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3、研究方向補勿帕輸雜畔Ｖ．、、ｖ．謂．ｔＣ研江巧生余ｓ．？Ｋ、兴．／．．‘．．知ｉ－ｉ指导教师李勤酿副授巧＂．？聲＃．Ｘ参Ｖ＂‘．．片為成时间前完和－、９－－＾．：．巧＞、扫可毒＇：；ｖ義；：ｙ．＇：；－ｖ；賢、塔？沒巧成哉坊令赫嶺．试！＾ｙ－？和－葛ｆ：茹於：ｙ齊；．‘－／思ｘ違；式義．，ｃ兴国方扛．４｜．，Ｘ琴．｝ｖ賓蘇；毅．：道寒蠢巧和．ｖ．Ｋ曾ｒｖ契护奮Ｖ方京诉後ｓ：，掉放皆Classificationcode：Q.939.5Universitycod

4、e：10712UDC：579.6Postgraduatenumber：2013050683Confidentialitylevel：PublicityThesisforMaster’sDegreeNorthwestA＆FUniversityin2016ISOLATIONANDCHARACTERIZATIONOFVIOLAPHILIPPICAPRODUCINGLUTEOLINENDOPHYTICFUNGUSMajor:ClinicalVeterinaryMedicineResearchfield:PoisoningandNutritionalMetabolismDiseaseinAn

5、imalNameofPostgraduate:YuJiangAdviser:Associate-Prof.LiQin-fanDateofsubmission:May.2016YanglingShaanxiChina紫花地丁产木犀草素内生真菌的分离鉴定摘要植物内生真菌能够产生与宿主相同或相似的化学成分。本试验以紫花地丁为材料，通过分离、鉴定和纯化，寻找产木犀草素内生真菌。同时进行抑菌试验，筛选出抑菌活性较强的菌株，制备抑菌活性较强物质，为木犀草素提供新的药物来源。通过实验研究获得如下结果：1.从紫花地丁分离得到51株内生真菌，其中根19株、茎15株、叶11株、种子6株。对51株内生真

6、菌的菌丝提取液进行色谱分析，薄层色谱分析显示菌株G9菌丝提取液与木犀草素标品具有Rf值（0.667）相同的荧光斑点；高效液相色谱法检测发现，菌株G9的内生真菌与标品有相同的出峰时间，含量为66.09μg/g（成分含量/菌丝干重）。菌株G9菌丝提取液经薄层制备获得单体，经核磁共振检测发现单体与木犀草素标准品的化学结构一致，确定菌株G9可以产生木犀草素。2.根据菌株G9菌落呈灰色，10d后直径25-30mm，新生菌丝呈白色，成熟后呈灰色，边缘整齐，培养皿背面黑色（图3-9A）；光学显微下，菌丝直径约为2-5μm，菌丝有隔，有分支，分生孢子为单胞，呈梭形，初步须壳孢菌Pyrenochae

7、tasp.。下一步对菌株G9的ITS序列PCR扩增，得到600bp的DNA片段，测序结果通过BLAST工具进行同源性分析，菌株G9与Pyrenochaetasp.（HM208713）位于同一分支，同源性达到99%，结合形态学和分子生物学鉴定结果将菌株G9归为须壳孢属Pyrenochaetasp.。3.对51株内生真菌菌丝提取液进行抑菌试验，结果表明菌株G21的抑菌活性强；对菌株G21的菌丝提取液进行薄层制备，得到G21-1、G21-2、G21-3、G21-4、G21-