H3N2亚型猪流感病毒致病性试验及其反向遗传操作系统的构建.pdf

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1、巧女学位论义乃人．权冲‘Ｖ＾Ｈ３Ｎ２亚型猪流感病毒致病性试验＾反向遗传操作系统的构建．—－ｃ．■：冷执．ｖ－：＾Ｓｍ杨文娟ａＷ。．心１—ｉ辱．．一．二〇六年五月：ｃ．；．．，＿Ｉ■＼■．．．．．＇０、．？■■？－、＇’、？ｉ．．？＇－，＾Ｓ户一Ａ‘＇－’＇＇＾－Ｖ：■－．．＇，＞：Ｖ：．，巧，心人．．〇辣ＶＩ’丫：‘：，，；甘担，．．；：、－令’早．，：

2、Ｖ＇．；，福Ａ／分类号Ｓ８５２．６５＋９．５密级公开ＵＤＣ６％．４硕±学位论文Ｈ３Ｎ２亚型猪流感病毒致病性试验及其反向遗传操作系统的构建杨文娟学科专业预防兽医学指导教师黄伟坚教授论文答辩日期２０１６巧５月２１日学位巧予日期２０１６年６月３０日答辩委员会主席刘文军研究员广西大学学位论文原谢性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人

3、或他人为获得广西大一学或其它单位的学位而使用过的材料。与我同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，目Ｐ；学校有权保存并向国家有关部ｎ或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索巧传播。，可Ｗ采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。□４＾保密。

4、＂＂（请在上相应方框内打Ｖ）６、２〇：论文作者签名：日期、＂６於指导獅签名：：日期Ｈ３肥亚型猪流感巧毒致病性试验及其反向巧传操作系统的构连摘要－２－－－（ＳＡａ３Ｇａｌ和ＳＡａ２６Ｇａｌ），猪拥有两种唾液酸受体，，使其可Ｗ被人＂＂。或禽流感病毒感染，因此被看作产生重组病毒的混合容器２００９年Ｈ１Ｎ１亚型流感病毒（ｐｄｍ／０９）大暴发，引起人类流感大流行，并引入到猪群中，目前，猪群中出现多种形式重姐的猪流感病毒（Ｓｗｉｎｅ虹ｆｌｕｅｎｚａＶｉｒｕｓ，ＳＩＶ）。因此，加强对ＳＩＶ的监控并了解其生物学

5、特性对于防控人流感暴发具有重要的公巧卫生意义。为了闽明新型重组Ｈ３Ｎ２亚型ＳＩＶｓ对猪的致病性，本研巧选用携带ｄｍ０９病毒的内部基因ＰＢ２、ＰＢ１、ＰＡ、ＮＰ和Ｍ和季节性人流感病毒的ｐ（）表面基因（ＨＡ和ＮＡ）获得的两株Ｈ３Ｎ２亚型ＳＩＶｓ，即Ａ／Ｓｗｉｎｅ／Ｇｕａｎｇｘｉ＾／ＮＮＸＤ／２０１３和Ａ／Ｓｗｉｎｅ／Ｇｕａｎ／２０１４（分别简称为ＪＧ１）ｇｘｉ／ＪＧ１ＮＮＸＤ和，。分别通过气管接种途径感染１０只仔猪，每组４只，阴性对照２只感染结果发现在感染后３天和５天的鼻拭子中均能检测到病毒，说明感染

6、流感病毒后猪可Ｗ通过鼻腔进行排毒。３ｄｉ和５ｄｉ剖杀发现ｐｐ，两姐病毒都能在肺脏４中复制，其中ＪＧ１组肺组织和肺洗液中的病毒含量更高（肺组织可达１０４ｗＰＦＵ／ｍＬ，肺洗液中可达１０ｐＦＵ／ｍＬ），肺部病变方化肺泡结构破坏更严重，炎性反应更明显。为了探索ＮＳ基因在引起猪致病性差异方面的作用，本实验通过ＲＴ－ＰＣＲ技术分别对ＮＮＸＤ株的８个基因片段及ＪＧ１株的ＮＳ片段进行了特Ｉ一ＨＷ２０００双向异性扩增，再经过系列克隆技术，将这些片段分别连接至Ｐ表达载体上，成功构建了具有感染性的重组质粒。然后通过细

7、胞转染技术，将重组质粒转染到２９３Ｔ和ＭＤＣＫ共培养细胞中，Ｗ期捶救出ｒｇＮＮＸＤ和ＮＮＸＤ－ｒｇＪＧｌ／ＮＳ。关键词：猪流感病毒致病性反向遗传学病毒捶救嵌合病毒ＩＩＰＡＴＨＯＧＥＮＩＣＩＴＹＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴｏｒＨ３Ｎ２ＳＵＢＴＹＰＥＳＷＩＮＥＩＮＦＬＵＥＮＺＡＶＩＲＵＳＡＮＤＴＨＥＣＯＮＳＴＲＵＣＴＩＯＮＯＦＲＥＶＥＲＳＥＧＥＮＥＴＩＣＳＹＳＴＥＭＡＢＳＴＲＡＣＴＡｓｗｅｋｎｏｗｉｓｃａｎｂｅｉｎｆｅｃｔｅｄｂｂｏｔｈｔｈｅｈｕｍａｎａｎｄａｖｉａｎ

8、ｉｎｆｌｕｅｎｚａ，ｐｇｙ’ｖｉｍｓｂｅａｃｕｓｅ化ｅｒｅａｒｅｔｗｏｋｉｎｄｓｏｆｓｉａｌｉｃａｃｉｄｒｅｃｅｔｏｒｉｎｉｓｕ知，ｐｐｇｐｐ－－－Ｋｓｔ－ｉｒａｔｏｒｒ