菌落总数实验报告1.doc

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1、检验报告实验名称：菌落总数的检验实验方法：平板计数法商品名称：夸夸唔、有友、奇爽、乐棒棒、香猪脆、香脆肚。参照标准：GB4789-172011总负责人：熊经理检验人员:徐恒琴、崔艳霞、游惠检验时间：2011年7月26—8月6号2011年8月8日菌落总数的检测平板计数法一、实验目的为了进一步了解与熟悉我们产品的操作规范和关键点的控制，掌握菌落总数的检验方法和了解超净工作台的操作规范。二、实验仪器设备和所需试剂及试剂的配制。1、实验仪器及设备杀菌锅YXQ—LS—SU编号5090、无菌超净工作台SW—CJ—IC编号24、

2、JJ-Z型组织捣碎机、隔水或智能恒温培养箱GHP—9080、出厂编号13475、烘箱ZFD—5040(全自动型鼓风干燥箱）、蒸馏水制备机、灭菌过的250ml锥形瓶、1ml吸量管、10ml的吸量管、酒精灯、锥形瓶1000ml、培养皿、电子天平AL104、电磁炉、锅、锅铲、PH试纸、恒温水浴锅HH—4出厂标号160.53。2、试验试剂及配制2.1主要试剂：琼脂、无菌生理盐水、无菌水、75%的酒精、1moL/L氢氧化钠、1moL/L的盐酸。2.2药品试剂2.21琼脂：准确称取12.5g胰蛋白胨、酵母浸膏7.5g、葡萄糖3

3、.0g、琼脂37.5g、蒸馏水2500ml，加入至锅中煮沸溶解，先加入琼脂将其熬化，在加入其它样品，直至样品熬化即可关掉火，冷却后调解PH值（7.0左右即可）。酸性用氢氧化钠调节、碱性用盐酸进行调节，将在1200C高压灭菌15min即可。2.22无菌生理盐水：准确称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中。2.23无菌水：吸取1000ml的蒸馏水，将在1200C高压灭菌15min即可。2.241moL/L氢氧化钠：称取40g的氢氧化钠溶于1000ml的蒸馏水中在1200C高压灭菌15min即可。2.4575%的酒精

4、：分别吸取400ml的95%的无水乙醇和100ml的蒸馏水与500ml的容量瓶中。2.461moL/LDE盐酸：移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释至1000ml，在1200C高压灭菌15min即可。三．试验步骤1、样品的稀释1.1固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。1.2液体样品：以无菌吸管吸取25ml

5、样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。36℃±1℃48h±2h.2、检样与接种：25g(ml)样品+225ml稀释液，均质，10倍系列稀释选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，各取1ml分别加入无菌培养皿内。2.1用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1ml，沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。2.2.按

6、上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管或吸头。12.2.根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。3、倒平板：在酒精灯开着的条件下进行到培养皿的3分之一即可，而其中琼脂的温度需要在46℃即可倒入琼脂，不然会影响其细菌的生长繁殖。平板计数琼脂培养基，混匀.4、培养：待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±

7、1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4ml），凝固后翻转平板，5、报告6.菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。6.1选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落

8、数应采用两个平板的平均数。6.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。6.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。7结果与报告7.1菌落总数的计算方法7.1.1若只有一