[精品]鹅掌楸的组织培养技术研究.doc

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1、鹅掌楸的组织培养技术研究鹅掌楸的组织培养技术研究【文章摘耍】本文研究了鹅掌楸的组织培养技术，试验结果表明：最佳诱导培养基为以MS为基础培养基，添加0.5mg/LBA,0・6mg/LIBA,0・1mg/L2,4-D,0.4mg/LNAA,3ml/LYZ,5ml/LHXZ；最佳继代培养基为B5为基础培养基,添加0.4mg/LBA,0.lmg/LNAA,5ml/LHXZ,2ml/LYZ；最佳生根培养基为1/2MS为基础培养基，添加0.加g/LNAA,0.加g/LTBAo【关键词】鹅掌楸；组织培养技术；研究鹅掌楸也可以称作马褂木，种源稀少，是国家保护的三级濒危树种。它是园林绿

2、化的珍贵物种，因为形状和马褂状相似而得名，单叶互生，树冠圆锥形树十十分比直，树形优美，绿叶繁茂，显得十分别致，并独具特色。它的花期在5-6月份，两性花，气味氛芳，观赏价值很高。尤其是叶形奇特，和马褂相似，深秋叶色金黄，可以作为园林庭园观赏树种和行道树，经济和发展前景广阔。但是，因为鹅掌楸雌雄花成熟期不相同，不能保证种子的充分受精，它的种子发芽率还很低，所以，鹅掌楸生长繁殖的主要方式是无性繁殖。对于鹅掌楸来说，无性繁殖的方式有押插和嫁接，但是这两种方式,不易生根，存活率比较低。因此，鹅掌楸采用组织培养技术进行无性繁殖，可以提咼生根率，提咼它的繁殖速度，加快优良鹅掌楸品种

3、的推广。1材料和方法1・1试验材料及处理选择鹅掌楸时，耍选取单株生长势头良好的作为母株，并且外植体上无萌芽。外植体的处理步骤为：先用饱和洗洁精溶液摇洗5min,然后冲洗干净，在无菌工作台中灭菌，灭菌溶液分别为75%的酒精和0.1%升汞溶液,灭菌时间分别为0.5min和lOmin（先用75%的酒精灭菌），灭菌完后，用无菌水冲洗，冲洗次数不得少于4次，每次冲洗的时间不得少于Imino1.2培养方法本研究中采用的基本培养基为MS和B5,分别在两种基本培养基上添加不同浓度及种类的激素，对愈伤组织和芽体进行诱导、增殖、生根的培养。以上两种培养基的pH=6.0,并加入蔗糖和琼脂，

4、蔗糖为30g/L,琼脂为6.5g/Lo生根培养基附加蔗糖为20g/L,生根培养基及愈伤组织诱导培养基中添加活性碳为l・Og/L。培养条件为光照恒温培养，光照吋间为16h/d,光照强度约3000Lx,室温约为25-27°C,室内相对湿度控制为75%。2试验结果及分析2.1不同激素和培养基对外植体愈伤组织的影响试验处理，添加的激素分别为BA.KT、IBA>NAA、YZ、HXZ、2,4-D,分别设置3个浓度梯度，BA的浓度设置为0.5mg/L>1mg/L和1.5mg/L,KT的浓度设置为0mg/L.0.25mg/L和0.5mg/L,NAA的浓度设置为0.2mg/L.0.4m

5、g/L和0.6mg/L,IBA的浓度设置为0mg/L.0.3mg/L和0.6mg/L,YZ的浓度设置为lml/L>2ml/L、3ml/L,HXZ的浓度设置为5ml/L,10ml/L,15ml/L,设计18个试验。其中HXZ,为稀土植保系列，先稀释200倍再使用。YZ是母株顶端的嫩叶溶液，先将它加水研磨然后再进行过滤，即得溶液，研磨吋水和嫩叶的质量比是5：2。将经过处理之后的外植体用无菌银子接种于诱导培养基中，培养8d后，基部慢慢膨大，表面开始出现愈伤颗粒，愈伤颗粒呈浅绿色，并开始逐渐长大。培养15d后，发现细胞分裂素6-BA显著影响愈伤组织的形成，但其浓度高吋，形成的

6、愈伤组织生长部量，当其浓度为0.5-1mg/L之间时，形成的愈伤组织长势良好，呈绿色，质地紧密。激索KT无决定性影响愈伤组织的诱导。愈伤组织在生长素浓度较高的培养基上长势较好。此外，适量的YE及HXZ利于愈伤组织的形成和生长。试验结果表明，培养基MS-4,MS-5,MS-7中，形成的愈伤组织较多，呈绿色，有光泽，长势较好，质地紧密，长出芽点，对于愈伤组织的形成和生长有促进作用。接种于诱导培养基中，培养6d-8d后，外植体产生褐变的现象，严重的甚至会导致死亡。在本实验中，由于转接周期缩短了，这在一定程度上减少了外植体褐变的发生，降低了外植体褐变的死亡率。2.2不同激素和

7、培养基对不定芽的影响将愈伤组织进行转接，接种在增殖培养基上，继代培养20d,分析不同激素和培养基条件下不定芽的诱导情况。试验结果表明：在B5培养基和MS培养基中添加相同种类和浓度的激素，B5培养基的分化率和芽苗生长状况要高于MS培养基。同时，添加了较低浓度的生长素NAA和细胞分裂索IBA的培养基的分化率和生长状况都比添加了高浓度生长素IBA和细胞分裂素IBA的培养基要好。培养基B5-17的分化率最高，幼苗生长健壮。所以，B5培养基和MS培养基相比，更适于不定芽的诱导，生长素屮NAA诱导效果最好，较低浓度的细胞分裂素更加适用于不定芽的诱导。2.3不同激