肝素钠提取原料中牛羊源成分的分子检测方法.pdf

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1、!!!!!!!!!!!!g!!!生!!‘：丛!!!!!!!!!里P塑!!翌!!皇!!里!!鱼!!!!堡型!!!!!!肝素钠提取原料中牛羊源成分的分子检测方法向海1，陈晓勇12，尹涛。，张有文。，于光辉。，OHDBrahil，张胜泉。，赵兴波”(1．中国农业大学动物科技学院，北京，100193；2．河北省畜牧兽医研究所，保定，071000)引言肝素钠(HepafinSodium)是具有抗凝血和降血脂作用的粘多糖硫酸酯类药物。肝素钠原料药主要从健康生猪小肠粘膜提取加工而成，我国生猪屠宰量占全球50％以上，拥有全球最丰富的肝素钠原料资源，是全球肝素粗品和肝素原料药的主要生产国和出El国。但一些不法商

2、家为降低成本，在原料中掺入与猪小肠绒毛外观近似的牛羊源成分，使得肝素钠品质得不到保障，同时肝素钠是一种Taq酶抑制物，严重影响PCR反应，因此有必要建立一种可行的分子方法检测肝素钠提取原料中的牛羊源成分。材料与方法参考家猪Cytb基因序列(GenBankAF4868711)设计猪特异引物，F1：CGCCTACGCTATCCTACGTTCA，RI：GGCATTGACTTAGTGGTCGAAAT：参考牛羊Cytb基因序列(GenBank：NC一0068531；NC0050442)设计牛羊通用引物，F2：GTACTAGCCCTAGCCTTCTCT，R2：CCAATTCATGTGAGTGTCAAT。从

3、5个肝素钠原料样本中提取DNA，己知样本1、2仅含猪源成分，样本3、4、5含有牛羊源成分，提取产物经PCR产物纯化试剂盒纯化，消除原料中的抑制成分。获得的样本DNA经猪特异引物和牛羊通用引物PCR扩增。结果各样本扩增DNA扩增结果如图l所示。可见，样本1、2能被猪特异引物扩增不能被牛羊通用引物扩增，样本3、4、5既能被猪特异引物扩增又能被牛羊通用引物扩增。说明1、2号肝素钠提取原材料样本中只含猪源成分不含牛羊源成分；3、4、5号肝素钠提取原材料样本中掺有牛羊源成分，为不合格原料；该检测结果与己知样本成分完全吻合。图1肝素钠原料样品检测图图中，M为DLDNAMarker2000Plus；卜5编号

4、分别表示5个检测样本，+为阳性对照；M左侧为猪特意引物扩增结果；M右侧为牛羊通用引物扩增结果讨论通过设计猪特异引物和牛羊通用引物，并引入纯化试剂盒纯化纯化获得的DNA消除抑制物，本实验建立了一种可行的检测肝素钠原材料中是否含有牛羊源成分的分子方法。十通讯作者