soft agar assay protocol软琼脂克隆形成实验.doc

《soft agar assay protocol软琼脂克隆形成实验.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、1.软琼脂克隆形成实验1)配制1.2%和0.7%的琼脂糖，高压灭菌后置于55℃水浴中，使其保持融化状态。2)配含20%FBS、2×抗生素的2×RPMI1640培养基，37℃预热。3)灌下层胶：1.2%的琼脂糖胶与2×培养基1:1混合，加入到6孔板中，每孔3ml，室温放置待其凝固。4)等待下层胶凝固过程中消化B16conshRNA与B16Myo7ashRNA稳转细胞，计数，用无血清培养基调整浓度为5×104/ml，每孔用100μl细胞，设3个平行孔。5)下层胶凝固后灌上层胶：0.7%的琼脂糖胶与2×培养基1:1混合(温度约

2、40℃左右)，加入100μl细胞悬液，即5000个细胞，混匀，加入孔板中，每孔3ml。6)37℃5%CO2培养，约2-3周收细胞，0.1%结晶紫染色，计数并比较两组克隆形成情况。