稀释平板计数法.doc

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1、检测方法------稀释平板计数法一、原理稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，

2、故又称活菌计数。二、器材1．活材料：菌剂。2．培养基：酵母浸粉0.5%、蛋白胨1%、氯化钠1%、琼脂18%、PH7.0-7.2。3．器材：90ml无菌水、99ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管（或移液枪）、天平、称样瓶、记号笔等。三、实验方法1．样品稀释液的制备准确吸取待测样品l0ml（粉剂称取1g），放入装有90ml（粉剂99ml）无菌水将水灭好，检测前称量，在水中加1滴吐温80。并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，置摇床上振荡60min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成

3、10-1稀释液；再用1ml无菌吸管（或移液枪），吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，震荡60秒，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管(或枪头)吸取10-2稀释液1ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也震荡器上震荡60秒，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-8稀释度，测粉剂取10-9。可调整样品加入量，使平板上菌落数在50-150之间。2．平板接

4、种培养利用混合平板培养法用无菌吸管按无菌操作要求分别吸取稀释液1ml放入4个无菌平板中，然后分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养基，轻轻晃动动平板30秒，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，以无菌水做空白对照，按相同方法操作，37℃培养。24小时后即可计数。改变了培养基与培养温度，比原有方法效率高。四、计算菌落数：将结果填入下表中稀释倍数菌落数1234空白1g样品活菌数（菌落平均数-空白）*稀释倍数