练习++血红蛋白的提取和分离ppt课件.ppt

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1、课题3血红蛋白的提取和分离1思考1分离生物大分子的基本思路是什么？选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。思考2蛋白质的分离和提取的原理是什么？根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。2一、基础知识：㈠凝胶色谱法（分配色谱法）：1、凝胶：一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖）2、概念：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法33、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（），移动速度（），而（）的蛋白质

2、无法进入凝胶内部的通道，只能在（）移动，路程（），移动速度（），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短较快4用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质(D)A．路程较长，移动速度较慢B．路程较长，移动速度较快C．路程较短，移动速度较慢D．路程较短，移动速度较快4、具体过程56相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个B7㈡缓冲溶液：1、作用：能够抵制（）对溶液的（）的影响，维持PH基本不变。外界的酸或碱PH值82、缓冲溶液的配制3.为什么在本实验中实用缓冲溶液在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲

3、液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）9㈢电泳：1、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。2、原理：103.分类：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。测定（）通常用SDS—聚丙稀酰胺凝胶电泳蛋白质相对分子质量11使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于A电荷的多少B分子的大小C肽链的多少D分子形状的差异12二实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理—粗分离—纯化—纯度鉴定13思考人们用鸡的红细胞提取DNA，用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的

4、提取，人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。14选用红细胞作分离蛋白质的实验材料，下列是其优点的是(ABC)多A．血红蛋白是有色蛋白B．红细胞无细胞核C．红细胞蛋白质含量高D．红细胞DNA含量高151.样品处理血液血浆水分固体物质血浆蛋白无机盐磷脂葡萄糖等血细胞白细胞血小板红细胞（最多）血红蛋白（）90％161、样品处理（1）、红细胞的洗涤：（2）、血红蛋白的释放：（3）、分离血红蛋白溶液：17分离血红蛋白溶液有机溶剂（无色透明的甲苯层）脂类物质（白色脂溶性物质沉淀层）血红蛋白溶液（红色透明液体）红细胞破碎物沉（暗红色沉淀物）182.透析(粗分离)a过程：b目的

5、：c原理：除去样品中分子量较小的杂质透析袋能使小分子自由进出，而大分子保留在袋内。19（1）血红蛋白提取和分离的程度可分为四步：______、______、______和______。（2）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。①加入柠檬酸钠的目的是__________。②以上所述的过程即是样品处理，它包括______、______、收集血红蛋白溶液。20（3）收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗分离。①透析的目的是__________________。②透析的原理是__________________。①去

6、除分子质量较小的杂质②透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内21（4）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。①样品纯化的目的是______________________________。②血红蛋白有什么特点？__________。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去血红蛋白呈现红色，在凝胶色谱分离时，可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液；这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。22下列操作正确的是（D）A.分离红细胞时采用低速长时间离心B.红细胞释放出血红蛋白只需要加入

7、蒸馏水就可C.分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D.透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h23下面关于对血红蛋白提取和分离的样品的处理措施中，正确的是()多A．采集血样后要高速短时问离心获得血细胞B．洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则血浆蛋白无法除净。C．在蒸馏水和甲苯的作用下，细胞破裂，释放出血红蛋白D．释放血红蛋白后再经过离心，就可以使血红蛋白和其他杂质分离开来BCD24在蛋白质的提取和分离中，关于对样品