染色体核型分析ppt课件.ppt

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1、染色体标本制备及核型分析染色体核型分析1一、名词解释二、染色体标本制备三、染色体核型分析实验耗材前期处理实验步骤玻片标本质量评价计数标准、合格指标染色体核型排列核型检测的可重复性2一、名词解释核型分裂相一个体细胞中的全部染色体，按其大小、形态特征顺序排列所构成的图像。小鼠：♂40，XY、♀40，XX人类：♂46，XY、♀46，XX细胞分裂过程中每个时期的细胞形态特征，包括细胞的总体形状和遗传物质的变化。3一、名词解释数量变异（性染色体丢失/增加、近端着丝粒染色体三体）（中期）分裂相核型结构变异（缺失、重复、倒位、易位）4二

2、、染色体标本制备实验耗材仪器设备：超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、离心机、光学显微镜、刻度离心管、乳头吸管、棕色试剂瓶、载玻片、吹风机、玻片架、染色缸主要试剂：秋水仙素、低渗液、卡诺氏固定液、吉姆萨染液、胰酶、1NHCl、1NNaOH、MEF培养基、PBS5二、染色体标本制备前期处理样品要求：对数期生长，状态良好，紧密度高，折光性好，细胞量≥T25/60mm平皿差速贴壁法去除MEF（KSR培养体系除外）终止培养前1~2小时，加入秋水仙素（100ug/ml），最终浓度为0.1~0.2ug/ml。作用：破坏纺锤体防护：有剧

3、毒、无挥发性因素：时间、浓度67二、染色体标本制备固定细胞收获制片预固定低渗处理实验步骤8二、染色体标本制备细胞收获制片固定预固定低渗处理消化并收集细胞至离心管，吹打成单细胞悬液，250g，5min离心，弃上清实验步骤9二、染色体标本制备细胞收获制片固定预固定低渗处理加入37℃预热的低渗液（0.075mol/L）5ml，吹打至均匀，37℃水浴15-20min。实验步骤10二、染色体标本制备细胞收获制片固定预固定低渗处理加入37℃预热的低渗液（0.075mol/L）5ml，吹打至均匀，37℃水浴15-20min。实验步骤配制

4、：0.075mol/LKCl溶液作用：低渗作用因素：时间、温度、浓度11二、染色体标本制备细胞收获制片固定预固定低渗处理实验步骤离心弃上清，将细胞沉淀震荡悬浮或气泡吹打法轻柔地重悬细胞。沿管壁缓慢加入固定液0.5-1.0mL，边滴加边震荡均匀，静置5min后离心弃上清。12二、染色体标本制备细胞收获制片固定预固定低渗处理实验步骤离心弃上清，将细胞沉淀震荡悬浮或气泡吹打法轻柔地重悬细胞。沿管壁缓慢加入固定液0.5-1.0mL，边滴加边震荡均匀，静置5min后离心弃上清。配制：甲醇：冰乙酸=3：1，现用现配。作用：固定并维持染

5、色体结构的完整性防护：甲醇→毒性，冰乙酸→刺激性和腐蚀性13二、染色体标本制备细胞收获制片固定预固定低渗处理实验步骤（1）加入3ml固定液，静置30min，离心弃上清；（2）再次加入3ml固定液，吹打均匀并静置30min14二、染色体标本制备细胞收获制片固定预固定低渗处理实验步骤离心弃上清液，根据细胞数量情况，加入1~2mL固定液，吹打细胞制成悬液，悬液呈微白色时为最佳。15二、染色体标本制备细胞收获制片固定预固定低渗处理实验内容用滴管吸取细胞悬液，高空滴在冰冻玻片上，立即在酒精灯的火焰下过火几次，置80℃烤箱中烤片2h。

6、16二、染色体标本制备细胞收获制片固定预固定低渗处理实验步骤用滴管吸取细胞悬液，高空滴在冰冻玻片上，立即在酒精灯的火焰下过火几次，置80℃烤箱中烤片2h。要求：洁净、冰冻处理：逐片清洗（洗洁精→超声波→自来水→纯水），95%乙醇浸泡24h，纯水逐片刷洗，放置于装有纯水的器皿中，4℃保存。17二、染色体标本制备细胞收获制片固定预固定低渗处理实验步骤预热胰蛋白酶消化25-30s，Giemsa染色10min。清水冲洗染液，用吹风机吹干。18二、染色体标本制备细胞收获制片固定预固定低渗处理实验步骤预热胰蛋白酶消化25-30s，Gi

7、emsa染色10min。清水冲洗染液，用吹风机吹干。要求：0.25%，pH6.8～7.2作用：去除染色体上的蛋白质，便于染色。配制：Giemsa原液：磷酸缓冲液（pH7.4）=1：9，现用现配。19三、染色体核型分析玻片标本质量评价玻片颜色蓝紫色玫红色着色浅√解决方案配制新的染液；适当提高胰酶消化玻片的时间。20三、染色体核型分析玻片标本质量评价细胞密度过密适中过稀√解决方案制备玻片时，对每一个样品都先进行试片，并在镜下观察细胞密度，从而调整悬液密度。21三、染色体核型分析玻片标本质量评价分裂相密度足够稀少√解决方案适当提

8、高固定液中冰醋酸比例；制备较多的玻片22三、染色体核型分析玻片标本质量评价分裂相形态-紧密度过密适中过散解决方案过密：适当提高固定液中冰醋酸比例；过散：适当降低固定液中冰醋酸比例。√23三、染色体核型分析玻片标本质量评价分裂相形态过密适中过散解决方案过密：适当提高固定液中冰醋酸比例，增加滴片高度；过散：