烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法.doc

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1、烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法(YC/T282—2009)日期:2009/6/210:39:18作者:来源:烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法(YC/T282—2009)由国家烟草专卖局于2009年3月30日批准发布，自2009年5月1日起实施。前言本标准的附录,、附录B、附录C为资料性附录。本标准由国家烟草专卖局提出。本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会(TC144/SC1)归口。本标准起草单位:湖北中烟工业有限责任公司、中国烟草总公司郑州烟草研究院。本标准主要起草人:王娟、李丹、刘建锋、马舒翼、宋旭艳、郭国宁、刘克建

2、。烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法1范围本标准规定了烟叶中游离氨基酸的氨基酸分析仪测定方法。本标准适用于烟叶中天冬氨酸(Asp)、苏氨酸(Thr)、丝氨酸(Ser)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、)、胱氨酸(Cys)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、酪氨酸(Tyr)、缬氨酸(Val苯丙氨酸(Phe)、β-丙氨酸(β-Ala)、β-氨基异丁酸(β-Aia)、γ-氨基丁酸(γ-Aba)、赖氨酸(Lys)、组氨酸(His)、色氨酸(Trp)、精氨酸(Arg)等21种游离氨基酸的测定。2规范性引用文件下列文件

3、中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。YC/T31-1996烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1烟叶中游离氨基酸dissociatedaminoacid(freeaminoacid)intobaccoleaf烟叶的盐酸浸出物中，以游离状态存在、未结合在蛋白质分子中的氨基酸。4原理氨基酸为两性电解质，在酸性环境下形成阳离子。

4、烟叶中的游离氨基酸经酸溶液萃取后，经氨基酸分析仪的磺酸型锂离子交换柱分离，然后与茚三酮混合，通过加热反应，伯胺与之生成蓝紫色化合物，仲胺与之生成黄色化合物。两种衍生物使用波长分别为570nm和440nm的双通道紫外检测器同时进行定性定量分析测定(氨基酸分析仪管路图参见附录A)。5试剂除特别要求以外，本标准所使用的试剂均为分析纯试剂，水为去离子水。5.1盐酸溶液，0.005mol/L。准确移取420µL浓盐酸(质量分数为36%,38%)于1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。此溶液作为萃取溶液。5.2样品稀释液，pH2.20。准确称取四水柠檬酸三锂11.3g，柠檬酸6.0

5、g，溶于500mL水中，后加入20mL25%(质量分数)硫二甘醇溶液和15mL32%(质量分数)盐酸溶液。转移至1000mL容量瓶中，用水进行定容。1)5.3锂离子缓冲溶液5.3.1缓冲液A，pH2.95)。准确称取四水柠檬酸三锂11.3g，柠檬酸6.0g，溶于500mL水中，后加入50mL甲醇溶液和9mL32%(质量分数)盐酸溶液，转移至1000mL容量瓶中，用水进行定容。5.3.2缓冲液B，pH4.20。准确称取四水柠檬酸三锂18.8g，氯化锂4.2g，溶于500mL水中，后加入6mL32%(质量分数)盐酸溶液，转移至1000mL容量瓶中，用水进行定容。5.3.3缓

6、冲液C，pH3.50。准确称取四水柠檬酸三锂18.8g，氯化锂50.9g，溶于500mL水中，后加入10mL32%(质量分数)盐酸溶液，转移至1000mL容量瓶中，用水进行定容。钾钠缓冲液，pH5.51。5.4准确称取三水乙酸钠272.0g，醋酸钾196.0g，溶于200mL乙酸(99%,100%(质量分数))中，转移至1000mL容量瓶中，用水进行定容。2)5.5茚三酮溶液准确称取茚三酮20.0g，苯酚2.0g，溶于600mL甲醇中，转移至1000mL容量瓶中，用钾钠缓冲液(5.4)定容至刻度。此溶液应现配现用。5.6还原剂每1000mL茚三酮溶液(5.5)中加入0.

7、2g抗坏血酸。5.7混合氨基酸标准储备液1)锂离子缓冲溶液的配制方法为推荐性的，操作者可根据所使用仪器的情况自行调整。2)茚三酮溶液的配制方法为推荐性的，操作者可根据使用仪器的情况自行调整。本标准中所规定的21种氨基酸的浓度均为1.0µmol/mL。3)5.8混合氨基酸标准工作溶液分别移取一定量的混合氨基酸标准储备液(5.7)，用样品稀释液(5.2)配制成各氨基酸浓度均为5nmol/mL、20nmol/mL、50nmol/mL、100nmol/mL、200nmol/mL的系列混合氨基酸标准工作溶液。该标准工作溶液在4?冰箱内可保存3个月。