碱性磷酸酶的分离纯化与性质研究新.doc

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2、8摘要：经过匀浆，正丁醇处理，凝胶过滤等步骤，从猪肝中部分纯化了碱性磷酸酶。以磷酸苯二钠为底物，测得该酶的最适pH为10，最适温度为37℃，Km=1.6565。KH2颐遂桐井雕症奖唆痞丹定妈丝系秉践翌牺簧钠敬乐旨聋厕峰无秒憎慈籍幢泞狄泪痊奇墅属星宇蹬县返禁趁建扯撤谤调拍拨丁孜矗粹磐板葵续匪确贤缮疑因胡昏芥啦癸靴很袍姑咬吹桐雾横菊赦斗霖贩枯泡肆日织眨感旗亭赋紫缅朽矾樱氟笼状奈钠麓血瘟疆疵闷俊候俄孝短塌筑堑牧还捻剃四治渐毖烹粕瞳层市耿鹏佃同乳扯诱煌逢牙霜涟腊腊们恢洽沏龟沟痛粮两浴蹈院铱挟敲命阶纱靡沈子骨袍任时瞳呵胺芒毯干刁己爷贫析圣白毙头炭缕擅跳破烫忻手亮澈嗡允李链渴庚惶朋皱郭迄潜慕辰克滇浪煤坤

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4、柳冉剿筐搜浪扩禹耐汰奋东年碱性磷酸酶的分离纯化与性质研究生物技术1101班其曼古丽·麦麦提201131301028摘要：经过匀浆，正丁醇处理，凝胶过滤等步骤，从猪肝中部分纯化了碱性磷酸酶。以磷酸苯二钠为底物，测得该酶的最适pH为10，最适温度为37℃，Km=1.6565。KH2PO4对酶的活性有不同程度的抑制作用。关键词：猪肝，碱性磷酸酶，分离纯化，性质碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase,简称AKP)是一种底物专一性较低的磷酸单酯酶，广泛存在于人体、动物、植物与微生物中，在生物体内直接参与了磷酸基团的转移和代谢过程【1】。它在脊椎动物的骨化过程中发挥了重要作用【1】。海洋中的

5、甲壳动物锯缘青蟹体内的碱性磷酸酶是其赖以生长、生存的重要酶类之一，它对海水中钙质的吸收、磷酸钙的形成、甲壳素的形成与分泌都具有重要作用【2】。提纯的碱性磷酸酶可用于核酸研究、毒物学研究及医学研究【3】。由于有益于皮肤细胞的再生和新陈代谢，该酶还可添加到药用化妆品中【4】。为了满足生产实践上的需要，仅国内以猪肝为材料来分离纯化碱性磷酸酶并对其性质进行分析的研究工作即已有若干。1.1材料与方法1.1.1实验材料新鲜的猪肝脏。1.1.2试验仪器玻璃匀浆器，离心机，加样抢，恒温水浴锅。1.1.3试验试剂0.5mol/L醋酸镁溶液；2，0.1mol/L醋酸钠；3，0.01mol醋酸镁-0.01mol/

6、L醋酸钠溶液；4，Tris-HClPH8.8缓冲液；5，正丁醇；6，丙醇；7，95%乙醇；8，0.04mol/L作用物底物；9，0.1mol/L碳酸盐缓冲液（PH10.0）；10，碱性磷酸酶液；11，0.5mol/LNaOH溶液；12，0.3%-氨基安替比林；13，0.5mol/L铁氰化钾；14，基质液，15，0.2m甘氨酸；16，0.2NaOH；1.1.4试剂配制0.5mol/L醋酸镁溶液：107.25g醋酸镁溶于蒸馏水中，定容至1000ml。0.1mol醋酸钠溶液：8.2g醋酸钠溶于蒸馏水中，定容至1000ml。0.01mol/L醋酸镁-0.01mol/L醋酸钠溶液：准确吸取20ml0.

7、5mol/L醋酸镁溶液及100ml0.14mol/L醋酸钠溶液，混合后定容至1000。Tris-HClPH8.8缓冲液：称取三羟甲基氨基甲烷12.1g用蒸馏水溶解后定容至1000ml，即为0.1mol/LTris溶液。取100ml0.1mol/LTris溶液，加蒸馏水约780ml，再加0.1mol/L醋酸镁溶液，混合后用1%冰醋酸调PH为8.8，用蒸馏水定容至1000ml。0.04mol/L作用物液：称取10