矮化大豆内源激素.ppt

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1、矮化大豆内源激素表达水平的研究姓名：崔志强导师：徐永清摘要本文研究是以东农42及其矮化突变体HK808为实验材料，利用高效液相色谱技术进行的研究。对两个品种的内源激素表达水平差异进行了系统深入的研究。系统地阐述了大豆矮化突变体在内源激素方面与其野生型东农42的差别。前言阐述了矮化作物的研究价值，对我国矮化方面的研究及相关成果作了简要概述。提出了本篇论文研究的内容。最后说明了此次研究的目的。1.材料与方法试验材料：以东农42及其矮化突变体HK808的6叶1心期至13叶1心期的茎尖及茎为植物材料。试验方法：1.分离与纯化东农42及HK808的茎尖及茎，

2、选取8-15株，剪碎混合，鲜样分装成1.0g样品；液氮速冻，研磨成粉末状；↓向研钵中共加80%预冷的甲醇10ml，移入离心管中，再加入0.2gPVPP；↓不断振荡，于4℃冰箱中避光过夜；↓12h后振荡、4℃离心(15000r/min,10min)，上清液保存，残渣用80%甲醇10ml溶解，同时加入PVPP0.2g，充分振荡、4℃离心(15000r/min,10min)，重复2次；↓合并上清液，再加入PVPP，振荡离心(15000r/min,10min)，上清液置于三角瓶中真空干燥浓缩至原体积的1/3；↓过0.45um有机系超微滤膜；↓通过Sep-P

3、akC18柱收集滤液于三角瓶中，真空干燥去除甲醇；↓用3ml的PH3.0柠檬酸缓冲液进行溶解，然后乙酸乙酯等体积萃取2次，合并乙酸乙酯相，真空干燥去除乙酸乙酯，1ml流动相溶解，过0.45um滤膜；↓保存于4℃冰箱中待测。2.标准曲线绘制采用高效液相色谱法对控制植物株高密切相关的内源激素GA3、IAA及ABA进行测定。测定具体色谱条件：流动相为100%甲醇-水-冰乙酸(体积比为45：54.2：0.8)混合液，流速为1.0ml/min，柱温为40℃，进样量为20ul，检测波长为254nm，定量方法为外标标准曲线法。激素标准液的配置：准确称取IAA、G

4、A3和ABA各5.0mg，用流动相溶解，并定容至5ml，使母液浓度为1.0mg/ml，置于-20℃冰箱中避光保存。进样之前用流动相稀释，使IAA浓度分别为0.025、0.05、0.1、0.2、0.4ug/ml；GA3浓度分别为500、1000、2000、3000、4000ug/ml；ABA浓度分别为0.01、0.025、0.1、0.2、0.4ug/ml，最后将三种激素混标体积定容为1ml。三种标准品的HPLC色谱曲线上，赤霉素标准品的保留时间2.100min，吲哚乙酸标准品的保留时间为4.738min，脱落酸的保留时间为5.382min，以此为对照

5、，根据不同标准品的浓度，得出色谱峰面积，绘制标准曲线。通过试验结果绘制得到标准曲线，得峰面积y与标准品浓度x(ug/mL)之间的回归方程。2.结果与分析通过结果分析得出：东农42中GA3的含量显著高于HK808，IAA的含量要显著低于HK808，茎尖中东农42的ABA含量显著低于HK808，但在茎中两者无显著差异，茎尖及茎中的几种激素的比例分析表明，赤霉素在几种激素的比例中起到主导作用。3.讨论本部分就突变体HK808的IAA含量较高，但出现矮化性状的结果进行了推理。原因可能是：激素间相互影响造成。GA可调节IAA水平。这是因为GA可以降低了IAA

6、氧化酶的活性并促进蛋白酶活性，使蛋白质水解，IAA的合成前体(Trp)增多，GA促进IAA束缚型转化成游离型；另一个原因可能是HK808中的高浓度ABA对IAA产生拮抗作用，使IAA不能发挥其生理作用。4.结论两个试验品种茎尖及茎的内源激素含量变化及比值变化表明：在茎尖中，东农42中赤霉素的含量显著高于HK808，东农42GA3含量比HK808最多高出5.8倍（11叶1心）。在茎尖部东农42中IAA的含量显著低于HK808，IAA含量两个品种最多的时候相差43倍（10叶1心）。茎尖中，东农42的ABA含量显著低于HK808，两者差距在前三个时期较小

7、在4-7倍左右，后五个时期差距逐渐扩大，最高的差距在11叶1心时达到了34.8倍。东农42的GA3/ABA与(GA3+IAA)/ABA比值大HK808，而IAA/ABA的比值HK808均大于东农42并且呈显著差异。茎部的内源激素含量测定表明，茎部东农42的GA3含量显著大于HK808，两个品种中GA3含量最多相差3.8倍（10叶1心）。而HK808中的IAA含量显著高于东农42，两个品种IAA含量最多相差2倍（13叶1心）两个品种中ABA变化没有明显规律且差异不显著。东农42的GA3/ABA与(GA3+IAA)/ABA比值大于HK808，而IAA/

8、ABA的比值八个时期两个试验品种均无显著性差异。两个试验品种茎尖及茎的内源激素的分析表明：东农42中GA3的含量显著高于H