人体解剖生理学实验讲义.doc

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1、实验一神经干动作电位测定及兴奋传导速度和不应期测定一、实验目的：1、掌握坐骨神经标本的制备方法并按要求制备出完整的蟾蜍坐骨神经标本2、掌握神经干动作电位的引导、不应期及动作电位传导速度的测定方法二、实验内容：1、坐骨神经标本制备2、坐骨神经干动作电位测定3、坐骨神经干兴奋传导速度和不应期测定三、实验仪器设备和材料清单1、实验材料：蟾蜍或蛙、蛙类手术器械一套（包括探针、粗剪、手术剪、眼科剪、镊子、玻璃分针）、蛙板、滴管、培养皿、烧杯、棉线、棉球、滤纸片。2、实验试剂：任氏液3、实验仪器：生物信号采集处理系统、打印机、、神经标本屏蔽盒四、实验要求1、学会用细胞外电刺激诱发神经干动作

2、电位的方法；掌握生物电记录的一般原则和方法；熟悉生物信号采集处理系统的操作；2、要求学生了解科研过程，培养学生发现问题、分析问题、解决问题的能力；3、要求学生能独立操作每一个实验步骤，了解和掌握相关的原理，培养学生熟练操作。五、实验原理： 可兴奋组织如神经纤维在受刺激而兴奋时，细胞膜电位将发生一系列短暂的变化。由安静状态下的膜外正膜内负的静息电位变为兴奋状态下的膜外负膜内正的去极化状态。因此，在膜外兴奋区相对于未兴奋区来说电位为负。这种电位差所产生的局部电流又引起邻近未兴奋区的去极化，使兴奋沿细胞膜传向整个细胞，而原来的兴奋区的膜电位又恢复到膜外正膜内负的静息水平。这种可传播的

3、、短暂的膜电位变化称之为动作电位。可兴奋组织在一次兴奋之后，其兴奋性要经历一个规律的时相变化，依次是绝对不应期、相对不应期、超常期和低常期，然后才恢复到正常的兴奋性水平。六、实验方法：一）、实验步骤和观察指标1、仪器装置准备好生物信号采集处理系统及相关电极。2、制备蟾蜍坐骨神经标本（1）破坏脊髓：左手握住蟾蜍，用食指下压蛙头使头前俯(图1-1)，右手持探针从枕骨大孔垂直刺入，再向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织；然后将针退至皮下，再将针尖向后刺入椎管捣毁脊髓。若蟾蜍四肢肌肉松软，呼吸消失表示脊髓已破坏完全。否则，按上述方法再行破坏。图1-1破坏蟾蜍脑脊髓的图示图1-2剪除躯干上

4、部及内脏（2）剥皮以两腋下为水平点，沿胸廓剪开一圈皮肤，然后左手捏住头部，右手捏住断端皮肤边缘，向下剥掉全部断端的皮肤(图1-2)。(3)剪除躯干上部及内脏用左手在背部捏住脊柱尾端，让头与内脏自然下垂，右手持粗剪刀在骶髂关节水平以上1cm处剪断脊柱，剪除全部下垂的头及内脏，保留后肢，腰背部脊柱。将标本放在盛有任氏液的烧杯中。将手及用过的剪刀、镊子等全部手术器械洗净(4)分离两腿沿正中线用粗剪刀将脊柱分为两半（勿损伤坐骨神经），并从耻骨联合中央剪开两侧大腿。将分离后的两腿放在盛有任氏液的烧杯中。(5)游离坐骨神经取一只腿腹侧向上固定于蛙板上，用玻璃分针沿脊柱侧将坐骨神经根游离，在

5、脊柱近处用一线将神经结扎并剪断。将标本背侧向上固定。并于背侧沿坐骨神经沟(股二头肌和半膜肌之间的裂隙中)分离，剪断坐骨神经所有分支，一直游离至膝关节，再向下继续分离，在腓肠肌两侧肌沟内找到胫神经和腓神经，分离两支直至足趾，用线结扎，在结扎线的远端剪断，只保留坐骨神经，不要肌肉。将神经标本浸入任氏液中备用。3、神经干标本制备将标本盒的电极用浸有任氏液的棉球擦净。用自来水浸润的滤纸片贴于标本盒的内面，以防神经干燥。用镊子夹住标本两端的结扎线，将神经置于标本盒电极上，中枢端置于刺激电极侧，外周端放在记录电极侧。轻轻拉直神经，不要扭曲。二）、观察与纪录（1）寻找阈刺激和最大刺激先将刺激

6、强度设为零，再逐渐增大，直至出现动作电位时（此时的刺激强度即为阈强度）；逐渐增大至动作电位幅度达到最大值为止，该强度的刺激为最大刺激（记下该强度值）。（2）测定传导速度测量两记录电极之间的距离s（mm）和传导所用时间t（ms），然后，根据公式v=s/t，计算出传导速度。（3）观察不应期给神经干最大刺激强度使之出现两个大小相等的动作电位，如果出现则用改变刺激间隔的时间，逐渐缩短两刺激间隔时间至第2个动作电位刚好变小，此时的刺激间隔时间即为动作电位的恢复周期。如再逐渐缩短刺激间隔时间，第2个动作电位刚好消失，则该不应期为绝对不应期。记下绝对不应期，动作电位恢复周期减去绝对不应期就等

7、于相对不应期。（4）观察双相动作电位及单相动作电位以上观察到的都是双相动作电位，用小镊子将两根引导电极（r1至r2）间的神经干夹伤，可见动作电位的第二相消失，变为单相动作电位。七、实验报告要求：1、每人一份实验报告；2、严格按照实验步骤记录实验现象和数据，分析实验结果；3、实验过程是否存在问题，应如何改进？八、注意事项：1、神经干标本应尽量分离得较长越一些，且要剥离干净，但又不能损伤神经主干。分离时应用玻璃分针，并用眼科剪小心剪去神经分支及周围结缔组织，切忌撕拉。2、神经干标本应与记录电极紧