甘蔗及其根际土壤固氮菌的分离和特性研究.pdf

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1、学校代码：10564学号：2013204004分类号：Q933密级：硕士士学学位位论论文文甘蔗及其根际土壤固氮菌的分离和特性研究张洪彬指导教师：谭志远教授学院名称：农学院专业名称：遗传学答辩委员会主席：年海教授中国·广州2016年6月华南农业大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的

2、法律结果由本人承担。作者签名：日期：学位论文提交同意书本学位论文符合国家和华南农业大学关于研究生学位论文的相关规定，达到学位授予要求，同意提交。导师签名：日期：学科带头人签名：日期：摘要本研究采用无氮选择培养基从甘蔗及其根际土壤中筛选内生固氮菌和自生固氮菌。通过乙炔还原法测固氮酶活性；根据16SrDNA序列分析确定其系统发育关系；采用Salkowski比色法测其产生长素能力，Biolog板测定碳源利用情况，使用透明圈法定性测溶磷解钾能力；对固氮活性较高兼具备良好生理生化特性的菌株采用活菌计数法进行了培养条件优化；并

3、在每一属中选一个代表菌株采用盆栽方式进行水稻和玉米幼苗促生特性研究。主要得出以下研究结果：研究发现分离的35株固氮菌中，g1固氮酶活性最高，达1111.36nmol/(mL·h)，g7、g6、g116、g98固氮酶活性比较高，超过500nmol/(mL·h)，t108固氮酶活性最低为75.37nmol/(mL·h）。单从固氮酶活性来看，分离的具有高效固氮能力的优良菌株较多。各菌株分别属于节细菌属、芽孢杆菌属、克雷伯氏菌属、草螺菌属、鞘氨醇单胞菌属、解鸟氨酸拉乌尔菌属、泛菌属、劳尔特氏菌属。9个属中分离到菌株最多的属

4、是克雷伯氏菌属14株和芽孢杆菌属8株。其中克雷伯氏菌属菌株固氮酶活性最高，芽孢杆菌属菌株固氮酶活性最低。对固氮菌进行了生理生化特性研究，获得了9株具有较好的产生生长素能力的固氮菌，达到20.03~384.13mg/L。菌株b310、t134、g1、g7、g172具有较强的溶磷能力。对所有菌株进行了液体培养，测得t98、g1、g7、g172、g12、g24活菌数最高，以g24、g12、t98为代表进行培养条件优化，g24、g12、t98的活菌数分别达到8.8×991010CFU/mL，6.1×10CFU/mL，1.2

5、5×10CFU/mL。研究固氮菌对水稻和玉米幼苗生长的影响结果表明，8个代表菌株对水稻和玉米的株高、干重、鲜重、发芽率等都有显著影响。微生物肥料中有益微生物的种类，活菌数量直接影响其肥效的好坏。本研究丰富了固氮菌种质资源，为微生物肥料生产提供了优良的功能菌株。关键词：甘蔗；土壤；微生物肥料；固氮菌；生理特性IStudiesontheIsolationandCharacterizationofDiazotrophicEndophytesfromSugarcaneandtheirRhizosphereSoil.Zhan

6、gHongbin(CollegeofAgriculture,SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou510642,China)Abstract:Inthisstudy,theendophyticnitrogenfixingbacteriaandfree-livingnitrogen-fixingmicrobeswereselectedoutfromsugarcaneanditsrhizosphere.Nitrogenfixingenzymeactivitywasmeasu

7、redbyacetylenereductionmethod;Accordingto16SrRNAgenesequenceanalysis,thephylogeneticrelationshipsweredetermined;Usingthecolorimetricmethodtomeasuretheauxin,Biologboardwasusedtomeasurethecarbonutilization,Theabilityofdissolvedphosphorusandpotassiumwasmeasuredby

8、transparentcirclemethod;Thecultureconditionoptimizationwascarriedoutusinglivebacteriacountingmethodforthestrainswithhighactivityofnitrogenfixationandgoodphysiologicalandbiochemical