DMEM培养基配制方法.doc

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1、自行配制DMEM的方法及说明书这里是一份GIBCO的低糖DMEM粉剂配制说明（普通高糖的DMEM培养基配法是一样的）：TOPREPARE1*LIQUID1.Measrueout5%lessdistilledwaterthandesiredtotalvolumeofmediumusingamixingcontainerthatisasclosetothefinalvolumeaspossible.2.Addpowderedmediumto15to30℃(roomtemperature)waterwithgentlestirring.(Donotheatwater)3.Rinseo

2、utinsideofpackagetoremovealltracesofpowder.4.Add3.7gofNaHCO3perliterofmedium.5.Dilutetoadesiredvolumewithwater.Stiruntildissolved.(Donotover-mix)6.AdjustpHofmediumto0.2-0.3belowdesiredfinalworkingpH*useofINNaOHorINHClisrecommended.(Addslowlywithstirring)AfterpHhasbeenadjustedkeepcontainerclo

3、seduntilmediumisfiltered.7.Sterilizeimmediatelybymembranefiltration.(Positivepressurerecommended)*pHunitewillusuallyrise0.1-0.3uponfiltration.另外，在李玲、李雪峰编著的《细胞生物学实验》中配制方法如下：1制备新鲜三蒸水或Millipore超纯水。2称取所需量的干粉培养基，加入约终体积一半的三蒸水中；若配制一个包装的培养液，在将整个包装的干粉倒入三蒸水后，需用水洗包装袋内面2次，倒入培养液中，以保证所有干粉都溶解成培养液。磁力搅拌或人工搅拌

4、使之完全溶解。3根据包装袋上的要求补加所需量的碳酸氢钠；根据实验需要，添HEPES（5-20mmol/L）、谷氨酰胺和其他特殊物质。4加水定容到终体积。5必要时用1mol/L盐酸和1mol/L氢氧化钠调节pH。6用无菌0.22um滤膜过滤除菌，分装于无菌血清瓶中，4℃冰箱保存。配制好的培养液用前加入100U/mL青霉素和100U/mL链霉素，并根据需要加入血清（5%-20%）。