高氯酸水解-蒽酮比色法测定淀粉.doc

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1、高氯酸水解—蒽酮比色法测定淀粉含量一所用仪器：10ml刻度试管、紫外可见分光光度计（PELambda35）、电子天平（MEETTLERTOLEDOe=1mg,d=0.1mg）、胶头滴管、10ml移液管、5ml移液管、50ml量筒、离心机（TABLE-TOPLOW-SPEEDCENTRIFUGEXiangY;L-500）、100ml容量瓶、250ml容量瓶、数显恒温水浴锅（金坛市双捷实验仪器厂）、移液枪及对应枪头、旋窝振荡器、50ml离心管、慢速定量滤纸、锥形瓶、漏斗二、试剂配置：蒽酮-硫酸溶液：称取0.4g蒽酮溶于100ml88%的硫酸溶液（现配现用）淀粉标准液：称取20

2、0mg淀粉于250ml烧杯中，先加入5ml蒸馏水，再加入65ml52%高氯酸，用玻璃棒搅拌至完全溶解，用玻璃棒引流至100ml容量瓶，用蒸馏水洗涤烧杯数次，洗涤液倒入100ml容量瓶，最后用蒸馏水定容。10ml移液管取上述定容后溶液10ml于250ml容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。三、实验步骤：⑴标准曲线的制定用移液枪吸取淀粉标准溶液0.0ul（0.0ug）、125ul(10.0ug)、250ul(20.0ug)、500ul(40.0ug)、750ul(60.0ug)、1000ul(80.0ug)分别装入已准备好的10ml刻度试管，每个体积两个重复，用蒸馏水调节各试管内溶液

3、体积至2ml。把上述试管冷水浴2分钟，然后加入6ml蒽酮-硫酸溶液，旋窝振荡器上充分混匀，冷水浴2分钟，沸水浴5分钟，此时各试管中溶液呈蓝绿色，冷去至室温。同时，取2ml蒸馏水做空白对照。用紫外可见分光光度计，于640nm波长下进行吸光度测定，制备标准曲线。浓度（ug/ml）0.05.010.020.030.040.0OD6400.030.090.150.250.360.47⑵样品测定1.用电子天平称取2.5g（准确至0.001g）待分析样品于50ml离心管中。2.滴加2滴80%乙醇溶液润湿待测样品，加入5ml蒸馏水、25ml80%乙醇溶液，置于涡旋振荡器混匀。3.室温静

4、置5分钟。以2500rpm离心5分钟，弃上清。4.加入30ml80%乙醇溶液，重复步骤2、3。5.于残留物中加入5ml蒸馏水、30ml52%高氯酸溶液，置于涡旋振荡器涡旋10分钟，以2500rpm离心10分钟。6.将上清转入100ml容量瓶。1.于残留物中加入35ml52%高氯酸溶液重复步骤5、6。2.以蒸馏水定容至100ml。3.将8中溶液进行过滤，弃去最初5ml滤液。用10ml移液管移取10.00ml滤液于250ml容量瓶，用蒸馏水定容。4.取9中淀粉提取液2.00ml于10ml刻度试管，试管冷水浴2分钟，然后加入6ml蒽酮-硫酸溶液，旋窝振荡器上充分混匀。5.冷水浴

5、2分钟，沸水浴5分钟，此时各试管中溶液呈蓝绿色，冷去至室温。6.用紫外可见分光光度计，于640nm波长下进行吸光度测定。