饥饿和饱食对肝糖原的影响实验.ppt

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1、病原菌多基因调控机制研究实验二饥饿和饱食对小鼠肝糖原含量的影响实验目的学习比色法和722型分光光度计的使用方法；学会组织中糖原的定量测定方法；通过实验观察饥饿和饱食对肝糖原含量的影响。实验原理肝糖原占肝重的5%，由许多葡萄糖分子聚合而成，是动物机体内能迅速动用的糖储存形式之一。饱食后肝糖原含量增加，饥饿则肝糖原含量逐渐降低。本实验采用蒽酮显色法测定肝糖原含量。肝组织置于浓碱中加热，破坏其他成分而保留肝糖原；再用浓硫酸脱水生成糠醛衍生物；后者与蒽酮作用而形成蓝棕色化合物，且在620nm处具有强的吸光性。

2、在一定条件下，颜色的深浅与肝糖原的含量成正比，可与同法处理的标准葡萄糖溶液进行比色定量。实验材料小白鼠：饥饿与饱食，每两组各一只。器材：刻度吸管、水浴锅、722型分光光度计、手术剪刀、镊子等。试剂：0.9%NaCl；30%NaOH；葡萄糖标准溶液（0.1mg/ml）；蒽酮显示液与浓硫酸混合液。操作步骤实验动物的准备选择体重>25g的健康小白鼠，随机分成两组：（1）饥饿组：实验前严格禁食30h（单独放置于铁丝笼中，不要用锯木屑铺垫，以免小鼠啃食而影响实验结果，只给饮水）。（2）饱食组：正常摄食、饮水。2

3、.处死动物用颈椎脱位法处死动物，立即剖腹取出肝脏，0.9%NaCI溶液冲洗血污后，用滤纸吸干水分，准确称取饥饿鼠肝组织0.6g，饱食鼠肝组织0.4g（称重量不同以避免测量的吸光度值过高或过低）。右手拉住鼠尾用力向后拉，同时左手拇指和食指用力向下压住鼠头，将脊髓与脑髓拉断，小鼠便立即死亡。肝脏3.糖原提取取15ml大试管2支，分别编号，各加入1.5ml的30%KOH，将称取的饥饿和饱食小鼠肝组织分别放入上述2支试管中。置沸水浴中煮沸20min，每隔5min振摇试管1次。待肝组织全部溶解后取出冷却，将各管

4、内容物分别、全部移入2只100ml容量瓶中（用蒸馏水洗涤试管，一并收入容量瓶内），蒸馏水定容至刻度，仔细混匀。4.糖原测定取试管4支编号，按下表操作:混匀，沸水浴10min，冷却，以空白管调零，于620nm波长处读取吸光度。结果与计算X0.5注意事项：（1）注意保护自己，避免被强酸强碱灼伤；（2）肝脏称重准确；（3）沸水浴过程中，经常摇动试管。思考题：（1）为什么要做饥饿和饱食处理的两组小鼠？（2）如何避免个体差异对实验结果带来的影响？