花生青枯病抗性相关基因的分离及其功能分析.pdf

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1、万方数据IsolationandanalysisofdifferentiallyexpressedgenesfrompeanutinresponsetochallengewithRalstoniasolanacearumThesissubmittedtoQingdaoAgricultural1．-rI‘Un1VerS1tVInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofScienceDingYufei(CollegeofLifeSciences)

2、Supervisor：WangChuantangQingdao．ChinaJune，2012万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：丁于飞时间：列2，年’7月2日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农

3、业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：丁于否时间：列牌7,92日导师签名：乏缒·筮时间：k胁年7月功万方数据青岛农业大学硕士学位论文摘要花生青枯病抗性相关基因的分离及其功能分析摘要由Ralstoniasolanacearum引起的花生青枯病是我国花生上的一种毁灭

4、性病害。通过轮作、化学药剂和生物防治能够在一定程度上预防青枯病的发生，但是这些方法浪费土地资源，并且增加了种植成本。选育和种植抗青枯病花生品种是目前最为经济有效的防治途径。青枯病抗性育种主要有两条途径：一是对现有花生种质进行抗性鉴定，从中筛选出抗病、高产的品种直接加以利用；二是将现有抗源与当前主栽品种杂交，转移其抗性，培育抗青枯病新品种。但是受抗源种质遗传基础和筛选方法的限制，传统的育种手段难以满足生产需要。近年来随着分子生物学的发展，花生青枯病抗性育种也朝着分子水平迈进，分子标记和抗性基因分离等技

5、术的运用有助于加速花生青枯病抗性育种进程。花生栽培种基因组庞大，且含有较多重复序列。虽然近年来有不少关于花生青枯病抗性基因分子标记的报道，但是这些分子标记与抗性间的图距较大，实用价值不大。而差异表达分析能够在短时间内获得抗性相关基因，可望在育种上加以应用。本研究主要涉及花生青枯菌的遗传多样性分析以及花生青枯病抗性相关基因的分离，具体研究内容和结果如下：l、用SMSA培养基从青枯病罹病花生植株茎中分离青枯菌。具有强致病性的菌株在SMSA培养基上，形成不规则、中间为粉红色、具有很强的流动性的菌落。挑取典

6、型菌落，并利用青枯菌种特异性引物759／760对其进行鉴定。若扩增结果为一条280bp的单一条带，则说明分离得到的菌是具有致病性的青枯菌菌株。本研究中共分离得到11个青枯菌菌株。2、对分离得到的青枯菌进行生物型和遗传型鉴定分析。根据Fegan和Prior提出的Pmx．PCR对分离得到的菌株进行遗传型分析。根据青枯菌对于三种双糖和三种己醇的利用情况，对其进行生物型划分。经分析，分离得到的11个菌株均是生物型III、遗传型I。3、以抗青枯病花生品种日花l号和编号为RZ的青枯菌菌株为研究对象，分离花生青枯

7、病抗性相关基因。分别用109cfu／mL的菌悬液和无菌水处理种子，利用Genefishing技术分离得到菌液胁迫下花生种子中的差异表达基因。本研究中总共分离得到25个DEGs，这些差异表达片段大多是在处理3d和4d时得到的，其功能主要涉及到植物的信号转导、转录调控、蛋白质合成、抗病相关和基础代谢等方面。万方数据青岛农业大学硕士学位论文摘要4、对于其中的两个差异片段3d．A13和4d．A9做了进一步的研究。3d．A13和4d-A9分别编码亲环蛋白和ADP．核糖激化因子，可能与花生青枯病抗性相关。Rea

8、l—timePCR分析了这两个基因在不同处理条件和处理时间的表达量，并且通过RACE技术得到了全长cDNA序列，上传到GenBank中，登录号分别为：JN379457和JN379456。关键词：花生；Ralstoniasolanacearum；Genefishing；亲环蛋白；ARFII万方数据IsolationandanalysisofdifferentiallyexpressedgenesfrompeanutinresponsetochallengewithRal