动物细胞培养制药工艺.doc

《动物细胞培养制药工艺.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、武汉科技大学制药过程与工艺4武汉科技大学制药过程与工艺2本章内容4」制约动物细胞4.2动物细胞的生产特征4.3动物细胞培养技术4.4基因工程动物细胞的构建和筛选4.5重组人红细胞生成索的生产工艺武汉科技大学制药过程与工艺34.1制药动物细胞武汉科技大学制药过程与工艺4一动物细胞的结构与功能细胞膜细胞质细胞核没有细胞壁亚细胞器武汉科技人学制药过程与工艺5动物细胞的形态动物细胞属于真核细胞，结构复杂，分化精确，不同细胞执行不同的功能，例如神经细胞具有很长的分支，很多的纤维，以便接受和传递刺激,红细胞呈扁圆盘

2、状,增大其接触面等。但细胞在离体培养吋形态会发生变化。根据不同的需要将离体培养的细胞分为两类:贴壁依赖型和贴壁非依赖型，或贴壁细胞和悬浮细胞。武汉科技大学制药过程与??艺6动物细胞培养的代谢特征葡萄糖和谷氨酰氨:提供能量并作为合成代谢的前体。动物细胞葡萄糖限制:动物细胞的培养具有一定的灵活性，受限吋通过增加谷氨酰氨消耗得以补偿，反之亦然。动物细胞葡萄糖代谢:糖酵解为主，牛成内酮酸和乳酸，乳酸分泌到胞外并在培养液屮积累。另一条途径为TCA循环,彻底氧化产生CO2和水。一小部分为戊糖磷酸途径，生成生成4、5

3、、7碳糖和NADPH。屮间产物进入脂肪酸代谢、核酸代谢和氨基酸代谢。葡萄糖代谢旺盛,产生大量乳酸，对细胞有毒性。葡萄糖代谢和谷氨酰胺代谢重叠于内氨酸。武汉科技大学制药过程与工艺7Gin代谢:脱氨、转氨等作用，合成其他必需和非必需氨基酸。GIn氮源,Gin受限，增加其他氨基酸消耗以补偿。离体动物细胞系,转氨作用是主要代谢途径。谷氨酰胺在脱氨卿??催化下，脱氨产生氨，对细胞有毒性。谷氨酰氨与内酮酸发生转氨作用,生成内氨酸，进入培养液并积累。Gin能量:Glu转化为a■酮戊二酸，进入TCA循环。流加葡萄糖或谷

4、氨酰氨，控制整个代谢过程，避免有毒废物的积累。武汉科技大学制约过程与工艺8蛋白质糖基化与分泌表达蛋白质合成场所:粗糙内质网上的核糖体糖基化场所:内质网合成各种糖类，粗糙内质网腔内和高尔基体，加工修饰。不同细胞系糖基化特征不同，选择适宜细胞系。对于分泌型蛋白，分泌泡与细胞膜融合，释放到胞外，完成了蛋白质的分泌表达。武汉科技大学制药过程与工艺9动物细胞的生理特点1、分裂期长12・48小时，同一•种属不同部位的细胞也不相同，分裂期受培养条件的影响如温度、酸度、成分等,2、细胞生长需贴附于基质，并有接触抑制现象

5、。大多???二倍体细胞的生长都需在一定的基质上贴附，伸展后才能生长繁殖,机制并不清憩，当细胞在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片吋，即细胞与周用细胞接触时，细胞就停止增殖■接触抑制，若细胞转化成异倍体后，该抑制可解除。3、正常二倍体细胞的寿命是有限的正常二倍体细胞传代培养都是有限的，大约在50代左右，然后细胞就会逐渐死亡,但在培养基屮加入表皮生长因子或经口然和人为的因素转为异倍体后该细胞可转变成无限细胞系,更适合于工业生产。武汉科技大学制药过程与工艺104、动物细胞对周围环境十分每攵感物理化学因素，如渗透压、

6、酸度、离子浓度、剪切力、微量元素等的变化都会影响其生长，这是由于动物细胞没有细胞壁的保护,所以更敏感。5、动物细胞对培养基要求很高原核生物只要有碳源、氮源和无机盐就可以生长;而动物细胞不仅需要12种必需氨基酸、8种以上维生索多种无机盐和微量元索、葡萄糖外,还需要多种细胞生长因子和贴壁因子。6、动物细胞蛋片质的合成途径和修饰功能与细菌不同动物细胞蛋白质的合成在游离和粗而型内质网上都可以进行，内质网上合成的蛋白质多数为糖蛋白，需要糖基化，血细菌细胞则没有糖基化过程。武汉科技大学制药过程与工艺11动物细胞制纱

7、的优缺点动物细胞生产药物的缺点：培养条件要求高、成本高、产量低；动物细胞生产药物的优点：多半可分泌到细胞外，提取纯化方便、蛋白质经糖基化修饰后与天然产物更一致，适合于临床应用。武汉科技大学制药过程与工艺12二制药动物细胞的种类n前用于制药的动物细胞有4类：原代细胞系直接取自动物组织、器官，经过粉碎、消化后获得的细胞悬液。需大量动物，费钱费劳力。二倍体细胞系原代细胞经过传代、筛选和克隆，从而从多种细胞成分的组织屮挑选并纯化出某种具有一定特征的细胞株。特点:二倍体;有明显的贴壁和接触抑制特性;有限的增殖能力

8、;无致瘤性。异倍体细胞系融合的或重组的工程细胞系无限传代、倍增时间短、对培养条件和生长因子的要求低，适合于大规模工业化生产。武汉科技大学制药过程与工艺13细胞系分类来源:原代细胞，传代细胞。寿命:有限细胞系,无限细胞系。染色体数FI:二倍体细胞系屏倍体细胞系。获得方式:工程细胞系,癌变细胞系。生长特性:贴壁依赖型,非贴壁依赖型细胞系。武汉科技大学制药过程与工艺14常用生产用动物细胞的特性WI-38:人二倍体细胞系，成纤维细胞，能产生胶原，倍